孔雀鱼遗传连锁图谱构建及性别特异标记筛选.pdf

孑L雀鱼遗传连锁图谱的构建及性别特异标记的筛选 摘 要 reticulata)又名百万鱼、彩虹鱼、库比鱼等，隶属 孔雀鱼(Guppy,Poecilia Actinopterygii)、鲻形目 于脊索动物f-](SubphylumVertebrata)、辐鳍鱼纲(Class (OrderCyprinodontiformes)、花鲻科(Family Poecilia)，原产于南美洲的委内瑞拉、圭亚那、巴西、巴巴多斯及特里尼达等国 家和地区，是一种极具观赏价值的小型淡水鱼。孔雀鱼繁殖周期短、易饲养，且 体表颜色和体型变化丰富，因此可作为遗传学研究的实验动物。孔雀鱼有23对 染色体，是XY性别决定系统，细胞学和遗传学上X和Y染色体都有差别，因 而为研究性别决定基因及性别相关标记提供了条件。本研究以孔雀鱼为主要研究 对象，构建了SSR和AFLP标记的孔雀鱼雌、雄遗传连锁图谱，并筛选得到了 一个性别特异的分子标记，为研究鱼类性别决定奠定了基础。 1． 孔雀鱼遗传连锁图谱的构建 利用AFLP和微卫星标记，以孔雀鱼F1全同胞家系为作图群体，构建了孔 雀鱼的雌性和雄性遗传连锁图谱。用120对AFLP引物组合对亲本和56个子代 个体进行了分离分析。共得到667个在亲本间有多态性并在子代中l：1分离的 AFLP标记，其中含385个父本分离标记和282个母本分离标记。卡方检验显示， 父、母本分离标记中共有18个偏分离标记，其他649个标记可用于连锁分析。 从304对微卫星引物中筛选出65对多态性引物(21．3％)，得到43个父本标记和 29个母本标记。另外，将性别作为表型标记一同进行连锁图谱构建。 分别用父本和母本标记构建了孔雀鱼雄性和雌性遗传连锁图谱。雄性连锁图 谱含25个连锁群(包括1个三联体及1个连锁对)，共332个标记(31个微卫 间最大间隔21．2cM，平均间隔3．6cM，平均每个连锁群上13．3个标记。雌性连 标记间最大间隔22．9cM，平均间隔4．3cM，平均每个连锁群上9．3个标记。性别 标记定位于雄性图谱第六连锁群上。 2． 性别特异标记的筛选 利用AFLP技术对比分析孔雀鱼雌雄基因组问的差异，筛选到1个雄性特异 的AFLP标记(PrcF262)。对这个标记进行回收、克隆、测序，根据所得核苷酸 序列设计了一对引物，仅能在雄性个体基因组DNA中扩增到到特异条带，成功 的把AFLP标记转化为SCAR标记。建立了快速鉴定孔雀鱼遗传性别的PCR技 术。 关键词：子L雀鱼；微卫星；AFLP；遗传连锁图谱；性别特异标记 ConstructionofGenetic of andIsolation LinkageMapsGuppy of AFLPmarkersin sex—specific Guppy(Poeciliareticulata) Abstract toclass Guppyfish(Poeciliareticulata)belongs Poeciliidaeand Poecilia．It fish)，orderCyprinodontiformes，familygenus mainly and of inhabitsthecoastalstreamsandriversof several Venezuela,Guyana，Surinam LesserAntilles Trinidadand hasbecome the including