偃麦草属牧草苗耐盐性综合评价及中间偃麦草nalt;#39;+gt;hlt;#39;+gt;逆向转运蛋白基因的克隆.pdfVIP

摘要 盐胁迫是全世界范围内影响作物产量的最严重的非生物胁迫之一．利用基因工程提高植物的 耐盐性，培育出能适合在盐渍化土地上生长的植物品种是有效利用盐渍化土地的主要方法。指标 筛选与综合评价是牧草耐盐性育种的前提。偃麦草属饵切嚏如脑)植物是优质的栽培牧草，也 是小麦的野生近缘种，在小麦的遗传改良中具有十分重要的利用价值。 本实验对引自国外的21份野生偃麦草属种质资源材料。在不同盐分梯度胁迫下。研究了苗 期生长、渗透调节、叶片Na+和K+含量、细胞膜伤害、叶片光合指标与植物耐盐性的关系；进行 了苗期耐盐性指标筛选与综合评价，克隆了中间偃麦草液泡膜Na+／H+逆转运蛋白基因，并进行了 生物信息学分析．研究结果如下： (1)不同NaC!浓度胁迫下僵麦草属牧草存活率随着浓度增高而降低，对照、盐浓度o．4％、 存活率都大于5006；盐浓度0．8％胁迫下存活率在27％．-．93％，其中存活率大于50％的有 15份：盐浓度1．0％11办迫下存活率在10％v73％，其中存活率大于50％的只有5份，供试 材料出现大量死亡。综合评价值D和存活率耐盐系数高度正相关，相关系数为0．9370， 表明综合评价值D能较好地反映材料耐盐性的真实情况，在盐胁迫下偃麦草属牧草材料 存活率越高其耐盐性就越强，反之存活率越低其耐盐性越差。 (2)通过2t份偃麦草属材料存活率、株高、根茎比、生长胁迫指数和叶片伤害率的测定，利 用主成分分析法和隶属函数法，对2l份偃麦草属材料耐盐性进行了综合评价，结果表明： ZXY03P-433 材料 材料 ZXY03P一388,Z,XY03P-349。的耐盐性较强， (3)选取10份材料，在不同梯度NaCI胁追下，通过存活率、K+／Nd、丙二醛含量，脯氨酸 含量等12项与植物耐盐性相关指标的测定，利用相关分析、主成分分析、隶属函数法和 通径分析，进行了偃麦草属植物苗期耐盐性指标筛选及综合评价的研究。结果表明：存 活率、K+／Na+、丙二醛含量、脯氦酸含量、生长胁迫指数、相对生长速度6个指标可以对 偃麦草属植物耐盐性进行综合评价；10个材料的耐盐性预测值(vP)与耐盐综合评价值 (D)极显著相关． (4)盐胁迫下，偃麦草属材料叶片游离脯氨酸、可溶性糖含量逐渐积累，增强了其渗透调节 能力；低浓度胁迫下，叶片拒Na+能力较弱，Na+含量急剧增加，K+含量下降迅速，叶片 伤害率与丙二醛含量逐渐增加，随着盐浓度增大，离子泵被活化，叶片拒Nat能力增强， Na+含晕增加与K+下降较为缓慢，细胞膜伤害较为严重，伤害率迅速增加，幼j籍生长衰弱， 自身保护能力下降，丙二醛含量随之下降；盐胁迫下叶绿素含量、叶片蒸腾速率逐渐下 降，叶片净光合速率下降主要是由于叶肉光合细胞活性受到抑制而引起的；随着盐浓度 的升高，植株生K受到抑制，所有材料的株高、分蘖数，总生物簧、存活率显著降低． (5) 接扩增的方法从中问偃麦革(Elytrigia 名为TiNHXI(Aczssion 码含有546个氨基酸残基、分子量为59．8kDa的蛋白，预测等电点8．0。TiNHXI含有38 个碱性氨基酸，36个酸性氨基酸，256个疏水氨基酸及129个极性氨基酸。二级结构预 测表明该蛋白含约44％的∞螺旋、21％的p一折叠、4％的p．转角和29％的不规则卷曲。亲 疏水性分析显示，TiNHXI含有12个连续的疏水片断，其中lO个可能构成穿膜螺旋。序 elongare)、水稻 列分析显示，TiNHXI与小麦(Triticum4甜撕m)、长穗僵麦草(Elytrigia thaliana)等植物的液泡 (Oryzasativa)、小盐芥(Thellungiellahalophila)、拟南芥(drabidopsia 列比对结果以及进化树分析均表明TiNHXl应为定位于中间偃麦草液胞膜上的Na+／H+逆 向转运蛋白。 关键词：偃麦草属；耐盐性；