山羊核移植中供和受体细胞的准备及融合激活参数的研究.pdfVIP

摘要 核移褴羧零虽然获撵了疆大静发展，毽至今效零仍然}藏低，这与援移拣过程 中具体的技术环节裔很大的关系。本实验就山羊体细胞核移植过程中～些容易被 忽褫鲍淘题进行了磷究，旨在提高攀核移穰豹效率。用韬甏法分箱在山羊繁蓬季 节栖非繁殖季节收集卵母细胞进行体外成熟，平均每个卵巢收集卵母细胞数分别 受2。82教和3，§2技，成熬攀分鬟兔57％葶羹60％，蔫舅鹭不摄著妒》o．05)。在出 羊j#繁殖季节，分掰用切削法和抽吸法收集卵母细胞进行体外成熟，平均每个卵 巢收集露母维魏数分澍必窝3．02投秽l，le梭，袋熬率势裂必60％弱8I％，篾翼 h 左表带回，收集的襄母缨施体步卜成熟率梵努别52％、6S％粒60％，其中20～24 ℃缀成熟率显著高予其他弼组妒O．05)。分别用中科院动物所和宁波第二激豢厂 生产的FSHrLH及瓷寨动躲激素厂产HCG瓣出攀郛母缨熬避蠢臻乡}残熬，甥互 和76％，M199组照著低予其他两组(P0．05)，三组均未得至Ⅱ囊胚。与颗粒细胞 囊胚率分别为21％、lO％和7％，相互间差异显著(p(0．05)。用成熟的卵母细胞进 行核移植，在250v电压，一次电脉冲激活时，分别用10舻、20肛s和40雌的 电脉冲时程对重构卵进行电融合，融合后存活率分别为52％、44％和37％，相 v，10 他两组(p0．051。用250gs电融合时，分别对重构卵进行1次或2次电激， 两者融合后胚胎存活率(52％vs 69％， 21％，P0．05)、卵裂率差异显著(50％vs P0．05)和胚胎获得率均差异显著(26％vs15％，P0．05)。核移植后，重构卵分别 min、3～4 mill、90 继续培养30 h和9～i0h后进行电融台，9～10 h组(27绚和 3～4h组(31物的融合后死亡率显著低于30rain组(49哟和90mill组(56峋 rain组(59哆砷 CP0．05)；卵裂率9～10h组(68呦显著高于30mill组(53徇和90 po．05)；胚胎获得率也是9一lOh组(49呦显著高于30 rain组(24％) min(28％)和90 ∞0．05)。融合的重构胚用离子霉素激活后，移入含6-DMAP的培养液中分别激 活0h、2h、3h、4h、5 h和8～10h，激活后重构胚卵裂率2～10h的各组间无 显著差异C尸o，05)，但均显著高于未用6-DMAP(0 h)组的卵裂率cPo．05)。分别以 波尔山羊耳成纤维细胞和黄淮白山羊卵丘颗粒细胞为供体进行核移植，重构胚的 融合率分别为42％和51％，卵裂率分别为56％和72％，差异均显著∞o．05)。以 上结果说明，当运输时间为8h左右时，20～240的保存温度有利于卵母细胞的 体外成熟；有卵丘颗粒细胞共培养时，山羊孤雌胚胎可以在多种培养液中发育到 囊胚；山羊重构胚适宜电融合参数为250v,10Its，1次电脉冲；电融合前，继续 成熟培养重构卵有利于提高融合效率；联合使用离子霉素和6-DMAP有利于提 高激活效率，而6-DMAP的激活时间(2～lO h)不影响重构胚的激活效率。 关键词：山羊，核移植，体外成熟，孤雌激活，电融合，胚胎培养 Ⅱ and