牛抗菌肽bac、bac5和β防御素的研究——牛抗菌肽bac7、bac5和β防御素融合基因在原核、真核中的表达、纯化及抑菌活性分析.pdfVIP

摘要 摘 要 牛抗菌肽bac7、bac5是一种线性阳离子小分子多肽，牛∥防御素(LAP)属于防御素类， 他们在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。本研究根据GenBank中公布的牛 化于Ecoli 涵体形式存在，rB7．B5表达量约占细菌总蛋白的36．6％，分子量大小为33kD，与预测大小 相符。以8M尿素变性包涵体后，用Ni亲和层析柱纯化目的蛋白，经多步透析法复性的rB7．B5 对金黄色葡萄球菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性，本研究为新型抗菌制剂的研制和 开发奠定了基础。 根据Gen pFAST 受态细胞，筛选阳性菌落，抽提大分子质粒DNA，获得含Bae7．Bac5．13防御素基因的重组杆 状病毒穿梭载体，转染昆虫草地夜蛾Sf9细胞，出现细胞病变后，收集含有重组病毒颗粒的 培养上清，重新感染草地夜蛾St9单层细胞，收集St9细胞超声破碎，进行12％SDS．聚丙烯 酰胺凝胶电泳，可见表达的融合蛋白带，表达量约占细胞总蛋白的10．6％，分子量大小为 20kD，与预测大小相符。体外抑菌实验表明，重组的rB7．B5．BB蛋白具有对大肠杆菌的抑茵 活性，本研究为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。 关