猪肺炎支原体p7蛋白单克隆抗体的制备.pdfVIP

摘一 要 猪肺炎支原体(T忆l-ycoplasma Pneumoniaeofswine，MPS)的病原。MPS广泛分布于世界各地，以接触性、高度传染性、 慢性、高发病率和低死亡率为特点，由于Mhp能够破坏呼吸道黏膜．纤毛屏障，从而继发其 他致病菌的感染，给养猪业造成巨大的经济损失。该病早期检测比较困难以及缺乏特效的防 治药物，因此在疾病控制方面至今未能取得令人满意的效果。 伴侣蛋白Dnak是猪肺炎支原体的特异性外膜蛋白，伴侣蛋白Dnak的c端是其主要的抗原 决定簇。P97蛋白是目前研究最为深入的Mhp表面的黏附因子，P97蛋白的c端也是其主要的抗 为模板利用合成的特异性引物，扩增了DnaK基因的C末端，得到500bp的目的片段。扩增了P97 以上。鉴定阳性的重组质粒转化到大肠杆菌(DE3)中进行原核表达。获得的重组蛋白分别命 具有较好的免疫原性。 与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化，免疫8周龄的雌性BALB／c小鼠，每只每次50嵋，间 隔两周免疫一次，最后一次加强免疫不加佐剂，3d后，取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0 进行融合。以纯化30a-P97C作为包被抗原，用间接ELISA平行筛选阳性克隆，经有限稀释法三 次亚克隆后，获得两株针对P97的能稳定分泌特定性抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为A3C9和 株97KD左右