绵羊精原干细胞分化扩增的影响因素研究.pdfVIP

绵羊精原干细胞非分化扩增的影响因素研究 姓 名：唐红(动物遗传育种与繁殖) 指导老师：石国庆研究员管峰副教授 摘要 目的： 探讨精原干细胞体外分离和非分化扩增的影响因素，为研究精原干细胞体内外生存 条件及长期培养、定向分化和转基因奠定实验基础。 方法： 本研究中的实验动物选用2—5月龄绵羊公羔，取其睾丸以2步酶消化法、Pereoll不 连续密度梯度离心法、差速贴壁法分离纯化绵羊精原干细胞，分别以添加Oo,4、2．5％、5 睾丸支持细胞或绵羊胎儿成纤维细胞饲养层上，分别置于33C、35C、37℃，饱和湿度， 5％C02浓度条件下培养，每星期换液2次。每间隔一定时间，置倒置显微镜下观察，或 进行碱性磷酸酶(AP)组化染色检测、鉴定精原细胞。 结果： 1、Percoll不连续密度梯度离心和差速贴壁等方法可以有效的分离纯化绵羊精原细胞， 纯度可达56．7％。 2、37C条件下培养SSCs不但能有效减少培养体系中的已分化精原细胞，还能促进干细 胞的增殖。而在实验中，35℃条件下的细胞存活时间较长，增殖数量较多，35℃、37℃ 都是体外培养绵羊精原干细胞的较理想温度。 3