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一粒小麦软粒基表达载体的构建及遗传转化.pdf

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一粒小麦软粒基表达载体的构建及遗传转化

符号说明 万方数据 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………….I Abstract…...........…..........….........…..........…………….........…...................................…..............III 1前言………………………………………………………………………………………………………………………一l 1.1软粒基因研究进展………………………………………………………………………一l 1.1.1软粒基因组成……………………………………………………………………………l 1.1.1.1 1.1.1.3 Gsp—J『基因发现………………………………………………………………………3 1.1.1.4 Gsp一1蛋白分子的生化特点………………………………………………………….4 1.1.1.5 1.1.2 1.1.2.1 1.1.2.2 1.1.2.3 1.2小麦转基因技术……………………………………………………………………………6 1.2.1基因枪介导法……………………………………………………………………………6 1.2.2农杆菌介导法……………………………………………………………………………7 1.2.3花粉管通道法……………………………………………………………………………8 1.2.4其他转化方法……………………………………………………………………………9 1.3外源基因整合机制………………………………………………………………………..9 1.3.1研究外源基因整合情况的方法…………………………………………………………9 1.3.2外源基因整合的随机性和非随机性………………………………………………….10 1.4目的意义………………………………………………………………………………….1l 2材料与方法…………………………………………………………………………………12 2.1试验材料…………………………………………………………………………………12 2.1.1基因供体和受体……………………………………………………………………….12 2.1-2菌株及质粒…………………………………………………………………………….12 万方数据 2.1.3酶及生化试剂………………………………………………………………………….12 2.1.4主要仪器………………………………………………………………………………一13 2.1.5引物设计与合成……………………………………………………………………….13 2.1.6常用培养基……………………………………………………………………………..14 2.1.7常用溶液配制………………………………………………………………………….15 2.2试验方法…………………………………………………………………………………16 2.2.1目的基因的克隆……………………………………………………………………….16 2.2.2目的基因表达载体构建……………………………………………………………….19 2.2.2.1单基因表达载体构建………………………………………………………………..19 2.2.2.2双基因串联共转化表达载体构建…………………………………………………..20 2.2.2.3质粒大提……………………………………………………………………………一20 2.2.3基因枪介导的遗传转化……………………………………………………………….21 2.2.3.1小麦幼胚灭菌………………………………………………………………………一21 2.2.3.2基因枪轰击…………………………………………………………………………..21 2.2-4转基因植株的鉴定…………………………………………………………………….23 2.2.5 GUS组织化学染色法…………………………………………………………………25 3结果与分析…………………………………………………………………………………26 3.1 3.1.1 3.1.2单基因过表达载体构建……………………………………………………………….26 3.1

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