双胚苗水稻中特单倍体及其杂交后代基因组dna甲基化研究.pdf

摘要 DNA甲基化作为一种重要的表观遗传修饰，存在于许多高等动、植物中，在基 因表达调控、植物细胞分化、基因组印记以及系统发育中起着重要的调控作用。许多 研究发现DNA甲基化的变异能通过细胞的分裂传递给后代，为物种的变异和进化 提供了机遇。目前对DNA甲基化检测方法可概括为这三类：基因组整体水平的甲 基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。其中改良的AFLP方 5 法(MSAP)可用于检测基因组DNA 7．CpCpGpG位点甲基化水平。张红宇、彭 海等用该方法研究了来源于同一双胚苗水稻的单倍体、二倍体、三倍体，发现不同倍 性水稻的差异除了基因的成倍变化导致外，表观遗传修饰对其也有重要影响，它们之 间的甲基化水平和模式有明显的差异。 本研究用MSAP技术对编号为SAR II．628双胚苗的单倍体及其与蜀恢527 (R527)、蜀恢363(R363)杂交后代基因组DNA的5 7．CpCpGpG位点甲基化进 行特异性扩增，分析杂交后代与父母本DNA的甲基化差异性，以进一步了解单倍 体表观遗传的调控机理。取得的主要结果如下； 1．R527与单倍体的杂交后代Fl的甲基化敏感扩增多态性比率即扩增的总甲基化 本单倍体甲基化水平低，但甲基化水平变化不大，只有较低幅度的下降或升高。 2．通过比较杂交后代Fl、Fl’与其相应亲本的带型，推测其有5种类型的变化：A型， 杂交后代与其亲本甲基化模式相同；B型，去甲基化：C型，超甲基化；D型， 次甲基化；E型，不定类型。 3．双亲杂交形成杂交后代，其Fi、Fl’DNA甲基化模式经历了较大的改变与调整， 以协调来源于双亲的异质基因的协同表达，使某些基因高效转录，而有些基因转 录受到抑制。杂交后代的甲基化水平或低于父本高于母本(F1)，或高于父本低 于母本(Fl’)，这可能是由于杂交后代相对于其亲本甲基化水平和模式经过重新 调整以调控基因的表达，使后代能更好地适应环境的变化。 4． 因本研究采用的单倍体为这两个杂交后代的共同母本，通过比较分析Fl、Fl’与 父母本甲基化带型的差异，剔除因坏境、个体等因素造成的带型差异，可以确定 与单倍体有关的DNA甲基化差异位点主要有2种类型：(1)单倍体特有的甲 基化位点； (2)单倍体独立遗传的甲基化位点。 关键词：双胚苗水稻、单倍体、杂交后代、DNA甲基化、MSAP 2 Abstract inmuch all DNA consist epigenetic methylation，which propagation，issignificant in and cell modification．Itan role expressionregulation，plant playsimportantgene and tomanyresearches，the imprintingphylogeny。According differentiation，genomic division．To variationofDNA canbetransferredtothe cell date， methyrlation off