外源多胺对鸭梨粉受精过程中花柱蛋白质表达的影响.pdfVIP

摘 要 鸭梨属于配子体型自交不亲和果树，自花授粉结实率极低。有研究表明，在鸭梨花 期喷施一定浓度的多胺可以克服鸭梨的自交不亲和性，但对影响结实的重要环节授粉受 精过程中花柱内蛋白质的变化还没有深入研究。因此，本研究利用双向电泳技术和质谱 分析技术，对外源多胺处理前后不同时期鸭梨花柱蛋白进行分析，旨在寻找授粉受精过 程中变化的相关蛋白，从而为多胺克服鸭梨的自交不亲和性提供更充分的理论依据。主 要试验结果如下： 1.喷施不同的外源多胺，均能显著提高鸭梨自花授粉的花序坐果率和花朵坐果率。 效果最佳的多胺种类和浓度分别为 Put(0.25mmol/L) 、Spd(0.25mmol/L)和 Spm(0.05mmol/L)。 2.外源多胺处理后鸭梨花柱提取液对离体花粉萌发结果表明，适宜浓度的多胺可以 显著提高鸭梨花粉萌发率和促进花粉管的生长。效果最佳的多胺种类和浓度分别为 Put(0.25mmol/L) 、Spd(0.25mmol/L)和 Spm(0.05mmol/L)。 3.荧光观察鸭梨花粉管生长动态表明，自花授粉 72h 后，花粉管先端膨大，在花柱 中部停止生长。三种多胺都能促进鸭梨花粉管生长，其中以0.25mmol/L Spd 处理花粉管 到达花柱基部最多。对 0.25mmol/L Spd 处理后的子房进行石蜡切片观察，发现在处理后 72h 的子房中，花粉管已伸入到胚珠，释放精细胞。 4.随着鸭梨花柱发育的成熟，花柱中可溶性蛋白的表达发生了变化。在蕾期花柱中 有三条蛋白带（27.0kDa 、37.2kDa 和 40.0kDa ）发生差异表达。与异花授粉花柱相比， 在自花授粉 3d 的花柱中出现四条新的蛋白带（18.0kDa、22.5kDa 、27.4kDa 和 30.0kDa ）。 对上述处理进一步蛋白分离，发现在鸭梨蕾期花柱中，蛋白点 A （27.0kDa/pI4.8 ）发生 了特异表达。随着花柱发育成熟，蛋白点B （28.0kDa/pI5.7 ）表达量逐渐增强。随着授 粉天数的延长，蛋白点 C （28.5kDa/pI5.7 ）在异花授粉花柱中表达量减弱。 5.与自花授粉 3d 的花柱相比，0.25mmol/L Spd 处理后 3d 的鸭梨花柱有两条蛋白带 （22.5kDa 和 30.0kDa ）没有表达。进一步蛋白分离发现，随着授粉天数的延长，蛋白 点 B 在 Spd 处理的花柱中表达量逐渐减弱。蛋白点 C 表达量减弱直至消失。蛋白点 D （22.0kDa/pI5.3 ）在自花授粉 1d~3d 和 Spd 处理后 1d 的花柱均有表达，而在 Spd 处理 后 2d 和 3d 的花柱中消失。 6.通过初步的质谱分析，获得了 1 个同源性较好的蛋白点，为推定的自交不亲和蛋 白，其功能与调控S 等位基因有关。 关键词：鸭梨；多胺；蛋白质；双向电泳；自交不亲和 Effects of Exogenous Polyamines on Stylar Protein Expression During Pollination and Fertilization of Yali Pear Author: Yue Lei Major: Pomology Superviser: Prof. Xu Jizhong Prof. Chen Haijiang Abstract Yali Pear belongs to the kind of gametophytic self-incompatibility, the percentage of self-pollinated fruit set is extremely low. The res