手性有机磷农药稳定性及立体选择性生物行为研究.pdf

摘 要 我国对5种高毒有机磷农药(o曙anophosphorus pesticides，OPs)的全面禁 用将导致国内在农药使用上的巨大空缺，因此急需开发和生产既经济有效，又环 境友好的可替代品。OPs在结构上有两个特点：第一，容易因亲核试剂或其他因 素而发生变化，保存难度高；第二，有40％都是手性的，而手性OPs的不同旋 光异构体的药效、毒性、神经系统干扰和环境归趋等均有可能不同。因此，在新 OPs的开发和生态风险评价中，稳定性和手征性问题引起了广泛的关注，是农药 化学和环境科学研究的共同热点，已成为一个世界性的研究课题。 本文以两种我国目前推荐使用的高毒农药的替代品——氯胺磷(CP)和蔬 果磷为研究对象做了以下几个方面的研究： (1)对CP唯一的商品化制剂——30％氯胺磷乳油(CPEC)的常温贮存过 程进行监控，发现其不稳定性并解释相关机制。结果表明，氯胺磷乳油的不稳定 性与其助溶剂甲醇有关，引发两个后果：一方面，大部分CP与甲醇通过亲核加 成生成一个新的有机磷化合物——甲基氯胺磷(MCP)，此化合物后被证实稳 定且高效；另一方面，CP分解生成甲胺磷致使制剂的毒性增加。由此，30％氯 胺磷乳油的应用受到很大的限制，我们提出两条解决思路：第一是从外因出发， 开发氯胺磷新剂型，使其避免过于极性的环境；第二是从内因出发，以甲基氯胺 磷替代氯胺磷。 (2)鉴于环糊精在改善农药稳定性中的应用，本人制备、表征了CP／13．环糊 精的包合物，并分别从环糊精对CP的稳定性和毒性效应的影响来论证此包合物 作为CP新剂型活性成分的开发前景。结果表明，简单的固相研磨法可制得环糊 精与cP的包合物，当CP包结于D—cD后，其热稳定性提高3．6倍，同时环糊精 的包合对CP的活性和毒性均末产生明显影响。由此我们认为，与环糊精包合可 能是开发氯胺磷新剂型的一条较好的途径，具有一定的应用韵景。 (3)旋光纯异构体的分离和制备是研究手性农药立体特异性构效关系和环境行 为的首要前提和基本保障。本文借助多糖类商品化手性柱在HPLC上拆分并制备 CP、MCP和蔬果磷的旋光异构体标样。结果表明，CP和MCP的四个立体异构 AD柱上均得到基线分离，结合前人的研究我们进一步发现 体在Chiralpak ChiralpakAD柱对含碳、磷两个不对称中心的OPs的手性拆分具有普遍的适用 OD 性。多糖类手性固定相对蔬果磷的手性识别能力很强，ChiralpakAD、Chiralcel 和Chiralcel AD OJ三根手性柱均能有效分离蔬果磷的两个对映体，其中Chiralpak AD柱制备以上三 的分离效果最好，分离度为4．14。由上，本文采用Chiralpak 种有机磷化合物的单一旋光异构体，得到的旋光异构体标样的纯度均98％，可 用于生物学实验。 (4)在得到旋光纯异构体标样的基础上，我们进一步研究了以上三种有机 磷化合物在不同毒性效应上的立体选择性。 ①实验首先测定了cP们ff旋体，各立体异构体(峰I～峰4)及等摩尔对映 体混合物(pair1和pair2)的体外乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性及体内大型 蚤毒性，均发现了明显的立体选择性。其中，异构问对AChE的抑制活性大小为 峰4峰3峰2峰l，差异在1．1～18．1倍之间，对大型蚤的毒性大小为峰4 峰3峰2峰1，差异在1．1—21．42_间。进一步的酶抑制动力学研究表明不同 异构体对AChE的空间取向和磷酰化性能均不相同。 ②对MCP毒性的立体特异性研究开始关注农药对人体健康的影响，通过在 体外模式下对人成神经细胞瘤SH．SY5Y的AChE和轴突生长的抑制的测定，分别 评价了MCP对人体的急性和迟发性神经毒性的立体选择性。研究进一步结合 MCP在药效上的立体选择性探讨外消旋MCP及其手性富集产品作为农药的可能 性和价值。结果表明，外消旋McP稳定、高效、急性毒性低，但有可能引发迟 发性的神经中毒，因此作为农药使用有一定的限制。MCP各旋光