斜纹夜蛾spooptera litura fabricius卵黄原蛋白受体基因的分子特征和功能分析及其对重金属锌、铅胁迫的响应.pdf

舒迎花中ljJ人学博士论文 litura Fabricius卵黄原 斜纹夜蛾Spodoptera 蛋白／受体基因的分子特征和功能分析及其 对重金属锌、铅胁迫的响应 学生：舒迎花 导师： 张古忍教授 专业：农业昆虫与害虫防治 摘 要 卵黄发生(Vitellogenesis)是昆虫卵巢成熟的关键，直接影响昆虫的繁殖力。 昆虫Vg由雌虫脂肪体合成，分泌到血淋巴中，通过卵黄原蛋白受体(Vitellogenin 黄蛋白(Vitellin，Vn)晶体形式积累在卵母细胞中，为胚胎发育提供营养来源。 昆虫Vg为雌性特异性蛋白，其发生过程受到激素调控，对重金属等环境雌激素 反应敏感。通过检测动物Vg的变化，可以监控和评价环境雌激素污染的程度。 因此，害虫Vg和VgR的分子特征和功能研究不仅有助于深入理解害虫生殖的 分子机制，为农业生产中探求合理的害虫防治方法提供理论基础，而且可为利用 昆虫Vg作为生物标记物监控环境雌激素污染提供理论依据。 litura 本文以斜纹夜蛾Spodoptera 克隆和分析了垤和瞻尺基因的分子特征：运用RNAi技术抑制了瞻和瞻尺基 因的表达和调控了此虫生殖；采用饲料重金属胁迫法，研究了锌(Zinc，Zn)和 铅(Lead，Pb)对此虫生殖以及Vg的影响。主要结果如下： 1．克隆了瞻cDNA和部分VgRcDNA，命名为研瞻(登录号EU095334) 和SlVgR(未登录)。彤冶全长5339bp，ORF为5247bp，编码1748个氨基酸； 1 Willebrand 943和von factor domain，DUF Vg包含三个保守区域(Vitellogenin—N D type I 舒迎花lfIth人学博十论文 己克隆3342 bp，编码1113个氨基酸，属于低密脂蛋白受体(10wdensitylipoprotein receptor，LDLR)基因家族，包含4个LDLo保守结构。 mRNA在雌性脂肪体中特异表达，开始表达的时间是第6天蛹，表 2．研Vg blot h达到最高峰，随后逐渐减少；Western 达水平随着发育阶段增加，成虫羽化24 mRNA表达模式相 分析表明血淋巴中的Vg仅在雌虫中出现，分向模式与斟Vg 似，但发生时间推后24 mRNA仅在雌虫的卵巢中表达，开始表达的时 h。SlVgR 间是第6天蛹，随着发育阶段增力B，成虫羽化36h表达量达到最高峰，随后急 mRNA表达相似，但开始出现时间推迟 剧减少；VgR蛋白的分布模式与SlVgR h。 了24h，而最高峰提前了12 dsRNA是RNAi干扰彤瞻的最佳时期和最佳浓 3．第4天蛹注射3烬研Vg 度。RNA干涉Vg后，卵巢发育滞后且异常，产卵量显著减少，研嗜表达受抑 dsRNA，在成虫后期阶段起到干扰作用，但对蛹期没有 制；第6天蛹注射研Vg 影响；在斜纹夜蛾发育的蛹和