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深绿木霉rem突变菌株h6对黄瓜枯萎病的生物防治
摘要
本研究选用深绿木霉菌作为出发菌株，首先通过REMI技术(限制性内切酶介导
基因整合技术)来构建深绿木霉菌T23菌株的突变体库，以250
gg／mL的潮霉素作为
筛选标记，共获得了200个抗潮霉素稳定的转化子。对所获得的转化子进行抗性筛选
和生物防治实验，最终确定H6菌株为实验工程菌株，并系统探讨了H6菌株的液体
和固体发酵条件，主要结果如下：
1．固体发酵条件的种子液配方：马铃薯200 0．5
g／L，葡萄糖20g／L，MgS04·7H20
0．0075 0．0025 0．002 3．83
g／L，FeS04‘7H20g／L，MnS04g／L，ZnS04g／L，KH2P04g／t,，
1．42 1．1 l
NaN03g／L，(NH4)2S04g／L，CaCl2g／L。固体发酵配料及配置比例：麦麸：
固体发酵条件：培养料铺垫厚度为76Tn，种子液接种量为20％，发酵温度为恒温28
℃，通气量为0．5-4)．8win，每12h发酵罐内翻动培养料1次即可，固体发酵产物中
X
分生孢子含量最高可达1．6410¨个／g，固体发酵产物经400烘箱干燥后可直接使用。
2．液体发酵培养基配方：马铃薯200
g／L，葡萄糖20g／L，KH2P04l∥L，
0．5 0．01
MgS04·7H20g／L，FeS04·7H20g／L。液体发酵条件：培养基pH调至4，孢悬
mL／250 d，
液的接种量为0．2％(v／v)，瓶装量为100mL三角瓶，28℃条件下发酵3
X
液体发酵产物中厚垣孢子产量可达1．1 108个／g，高于目前国内外报道的生物量。
3．生物农药的配置方法：液体发酵产物按重量每20mL与70
g载体吸附(吸附
剂载体为5：1的硅藻土和轻质碳酸钙混剂)，再加入矿质营养元素10 7
g(KH2P04g、
l l 0．5 0．2 0．1
g、MnS04g、FeS04
MgS04g、CaS04g、(NH4)6M0702a‘4H20g、H3803
O．1 g)，混合均匀，干燥好制成颗粒剂(生物农药)。
g、ZnS040．1
4．生物农药与H6菌株固体发酵产物对黄瓜枯萎病的防治效果分别为95‰100％
和95．8％左右(使用剂量为8％)，可见生物农药的生防效果更为突出，且厚垣孢子制
剂的货架期长，可更好的满足生产和推广的需要。
5．通过H6突变菌株生防菌剂的盆栽及田间的菌剂施用剂量的筛选，得知最佳的
使用比例为8％(与土壤质量比)。
与此同时，本实验通过对黄瓜苗期一定时间内株高和鲜重的测量，以及对其根际
土壤的盐度及酸度的测量，发现H6的固体发酵产物除了具有良好的生防能力外，还
具有有效改良土壤的盐碱质地和促进黄瓜生长的作用，且使土壤酸度下降的趋势较盐
度下降的趋势更为明显。从而体现出此突变木霉菌剂的多功能性，使其更加具有应用
推广潜力。
关键词：限制性内切酶介导基因整合技术；木霉菌突变株；正交设计；发酵工艺
ControlofCucumberFu
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