甜菜夜蛾几丁质合蛋白secbp66生化特性分析.pdfVIP

摘要 围食膜(peritrophicmembrane，PM)是覆盖于昆虫中肠上皮细胞的非细胞几丁质． 蛋白质复合物结构层，主要由蛋白质和糖类(主要为几丁质)物质组成。昆虫中肠围 食膜蛋白的分离鉴定能够为深入研究害虫的生防机制，寻找生物防治新靶标，以及进 一步明确围食膜与病原微生物之间相互作用的分子机理等提供前提和基础。本研究对 甜菜夜蛾围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66进行了消化酶作用位点分析及生化特性研 究，并对SeCBP66蛋白进行了甜菜夜蛾幼虫的组织免疫定位。 白，Westernblot检测蛋白最终无法表达出特异的蛋白。 物，并在基因末端去除终止密码子，添加6×His Tag。将扩增得到的基因片段克隆入 VSeCBP66．2并将病毒株侵染昆虫纽胞系BTI—Tn一5B 蛋白，以Anti．His抗体为一抗Western 表达量最高。 结构中稳定结合几丁质。 利用再生几丁质纯化SeCBP66蛋白，并从棉铃虫围食膜抗血清中纯化制备特异 抗体。解剖甜菜夜蛾幼虫，取其组织进行SeCBP66蛋白的免疫定位，结果显示蛋白 在中肠以及围食膜中都存在，且在围食膜中检测到分子量更小的蛋白片段，说明 SeCBP66蛋白是由整个中肠分泌，在围食膜形成过程中可能部分降解，但仍然保留 其几丁质结合活性片段来成围食膜。 关键词： 围食膜；SeCBP66；毕赤酵母表达；细胞表达；几丁质结合 andBiochemical’CharacteristicsofChitin Protein Physiological Binding SeCBP66from Membrane SpodopteraexiguaPeritrophic Mastercandidate．．LiuBin GuoWei Supervisor：Progessor InsectandPestControl Major：Agicultural Abstract The a peritrophicmatrix(orperitrophicmembrane，PM)is extracellularmatrixthatoftenlinesthe of the insects thecontentsof midgut separating gut lumenfromthe cells the is anetworkof digestiveepithelialliningmidgut．It of composed chitinand towhich andother and proteins enzymes components identificationofintestinal membrane the andbasis pefitrophic proteinprovidesprerequisite forthefur