蜡样芽孢杆菌(acillus cereus)对草甘膦降解作用的初步研究.pdfVIP

摘要 草甘膦是一种非选择性的芽后茎叶除草剂，广泛用于防除双子叶、禾本科杂草等。 近年来，草甘膦由于优良的除草效果及抗草甘膦作物的种植，在我国已得到广泛的推 广和使用。目前，国内草甘膦转基因作物的研究成为了热点，而草甘膦降解菌株为转 基因作物研究提供了微生物资源。本试验通过富集培养的方法从土壤和废水中分离筛 选出120株降解菌，对其中降解能力较强的CW-1菌株进行了深入研究，主要研究结 果如下： 1．利用富集培养、驯化技术从草甘膦废水和长期旅用草甘膦的土壤中分离得到了 120株能降解草甘膦的微生物，包括20株真菌和100株细菌。利用紫外分光光度法 和高效液相色谱柱后衍生法测定了菌株对草甘膦的降解率。结果发现：真菌菌株 52．5％、60．2％和56．3％。 rDNA序列分析的方法对CW-1菌株进行了 2．通过生物学、生理生化特征及16S 鉴定，结果表明CW-1菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)。研究了CW-1菌株对草 甘膦的降解特性，明确了CW-1菌株降解草甘膦的最适条件：草甘膦浓度1500mg·L一； 培养时间5 mL(OD600=1)；葡萄糖浓 d；温度30℃；pH值8．0；CW-1菌株接种量4 度5g·L～。在上述适宜条件下，CW-1菌株对草甘膦的降解率为65．3％。草甘膦的耐 受实验表明，在草甘膦培养基2中，草甘膦浓度在16000～32000mg·L以时，该菌株生 长迅速；在草甘膦浓度为32000 mg·L’1 mg·Lo时生长量达到最高；草甘膦浓度为48000 时生长缓慢。 3．抗药性实验表明，CW-1菌株在含有氨苄青霉素、盐酸四环素的平板培养基上 能生长；在含有卡那霉素和氯霉素的平板培养基上不能生长。将从CW-1菌株中扩增 基因发生了多位点突变。将CW-1菌株中的小质粒和aroA基因分别转入大肠杆菌中， 转化菌株在含有48000 mg·L。1草甘膦的基础盐平板培养基中上能够生长；在含1500 中的aroA基因及小质粒中的基因均可能与降解草甘膦有关。 关键词：草甘膦；分离与筛选；CW-1菌株；微生物降解；aroA基因；降解机理 cereus studieson Bacillus Preliminaryglyphosate-degradationby Author：WangCong Supervisors：LiuYingchao Science Major：Pesticide Abstract afterbud isonekindofnon．selectiveherbicide stem，whichextensively Glyphosate controls and recent hasbeen weeds，etc．In dicotyledonouspoaceae years，glyphosate andusedinour ofitsexcellenteffectonweed acceptedwidely country，because andthe ofherbicide-resis