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褐飞虱精氨酸激基因的克隆及其rnai载体的构建和转化
褐飞虱精氨酸激酶基因的克隆及其RNAi载体的构建和转化
摘 要
褐飞虱(Nilaparvata
虫。RNAi在昆虫上成功的应用于鉴定多种基因的功能。这项技术在害虫防治领域也
取得了一定进展。精氨酸激酶是调节无脊椎动物能量代谢的重要酶之一。磷酸精氨
酸中的高能磷酸键在精氨酸激酶的作用下被转移形成ATP。褐飞虱精氨酸激酶
(Arginine
vitro T7
T7启动子的AK活性区正义链和反义链后利用in Kit体外合成
Transcription
dsRNA，利用包含该段dsRNA的人工饲料饲喂褐飞虱进行生物活性测定。初步结果
表明：持续饲喂人工饲料2d后，褐飞虱在饲喂含有akdsRNA的人工饲料后，开始
在植物中表达双链RNA，因此构建重组表达质粒，通过农杆菌侵染水稻愈伤组织的
利用PCR鉴定农杆菌转化子。以磷酸潮霉素转移酶基因为筛选标记，经过潮霉素筛
选后，最终得到再生苗移栽到温室培养。通过对标记基因的检测，RT-PCR检测插入
片段，得到抗性植株16株，PCR阳性植株3株，阳性率为3．7％。
关键字：褐飞虱，精氨酸激酶，RNAi，载体pdsl301，农杆菌
Abstract
Thebrown amemberofthe orderand
planthopper,Nilaparvata，z秽凇，isHemiptera
isthemost riceinsecttohave risetooutbreakin
devastatingpest given recent
years．RNA
a thathas
interference(RNAi)is been asa
technologicalbreakthrough developed
toolfor functionandforthe
powerful controlof
smdyinggene highlytargeted insect
pests．
Theeffectof a RNAi tosilencethe
usingfeeding-based
technique hrgininekinase(ak)
in Was kinase
geneNilapawam incellular
lugensexamined．Arginine
participatesenergy
metabolismin is to
invertebrates，whichthecreatinekinase
analogous reaction．
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