柱前衍生—液相紫外法检测常德特色食品中的甜蜜素.docVIP

柱前衍生—液相紫外法检测常德特色食品中的甜蜜素 　　摘要： 目的：建立快速分离和测定常德特色食品中甜蜜素的液相色谱紫外检测技术。方法：根据样品特性采取不同前处理方法，在强酸条件下，利用次氯酸钠将样品中的甜蜜素转化为N，N-二氯环己胺，用正己烷萃取，在ODS-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）上用甲醇（V）+水（V）=80+20为流动相进行分离，紫外检测器检测波长为314nm。结果：该方法在甜蜜素浓度10～100μg/mL内与色谱峰面积成良好的线性关系，回收率为89.7%～101.0%，检出限为3μg，测定结果的相对偏差小于1.0%。结论：该方法简便快速，灵敏度高，干扰少，适用于基层检测机构对各种食品样品的测定。 　　关键词： 柱前衍生；液相色谱紫外检测器；甜蜜素 　　甜蜜素的化学名称为环己基氨基磺酸钠，分子式是C6H12NNaO3S，是我国1986年正式批准使用的食品添加剂，口感良好，价格低廉，具有水溶性强，稳定性好等特性，广泛应用于食品加工业。近年来研究发现甜蜜素可能有致癌性，其代谢产物环己胺对心血管系统和睾丸有毒理作用[1]。一些国家如美国、加拿大、欧盟、日本等国家禁止使用甜蜜素作为食品甜味剂，而我国目前允许使用于部分食品中。常德特色食品中的剁辣椒、豆腐乳、擂茶、焦切（糕点）等，按照GB 2760-2011《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》规定[2]，甜蜜素检出限量为0.65g/kg，而对于常德酱卤肉制品、麻辣菽肉豆制品、酱香型白酒等食品，则要求“不得检出”。 　　常德对外旅游业发展迅速，特色鲜明的美食已成为常德的一张名片。如何在县级区域有效监控市售特色食品中的食品添加剂特别是甜蜜素的含量，督导生产厂家改进工艺，科学发展旅游食品，已成为食品安全和经济工作的重要课题。目前我国食品中甜蜜素检验的标准方法是气相色谱法、分光比色法和薄层层析法，检测限为4μg[3]。国家标准的试验过程较为繁琐，对仪器配置及性能要求较高，且样品前处理方法单一，不适用基层机构快速检测各类配料较为复杂的市售食品。已报道的高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素多采用二极管阵列检测器测定[6，7]，设备昂贵，而大多县级检测机构配置薄弱，无法同步；或采用亚硝酸钠作为衍生试剂，回收率较低，适用范围有限[4，5]，尤其对白酒检测不适用[8]；或用次氯酸衍生化后测定，研究对象单一，仅针对白酒[9]。笔者分析、改进并归纳了适用于常德特色食品的样品前处理方法，使用了不同的流动相比、衍生试剂加以比较，分析出最佳实验条件，检测了不同类别的常德特色食品中的甜蜜素含量，简便快速，适用于配有高效液相色谱仪带紫外检测器的县级质检机构开展日常工作，对基层食品安全风险监测起到重要作用。 　　1 1、材料与方法 　　1.1 仪器 　　高效液相色谱仪：SHIMADZU LC-10ATvp，附带紫外检测器，岛津（苏州）有限责任公司；涡旋混合器，金坛科兴仪器厂；搅碎机、超声波清洗机、真空抽滤器，天津莱斯特仪器有限公司；离心机，上海安亭科学仪器厂；电子天平，上海精密科学仪器有限公司；100mL 容量瓶、50mL及25mL玻璃具塞比色管，湖南化玻公司。 　　1.2 试剂 　　乙酸锌溶液：21.9g/L。称取乙酸锌21.9g，加入3.0mL 冰醋酸，用水溶解并定容到100mL。 　　亚铁氰化钾溶液：10.6g/L。称取亚铁氰化钾10.6g，用水溶解并定容到100mL。 　　次氯酸钠试验液：把次氯酸钠溶液（含有效氯7.5%）用水稀释到2倍体积。 　　硫酸溶液：把浓硫酸用水稀释到2倍体积。 　　氢氧化钠溶液：0.5moL/L。称取分析纯氢氧化钠2.0g，用水溶解并定容到100mL。 　　氯化钠：分析纯。 　　正己烷、甲醇：液相色谱纯。 　　甜蜜素标准品：纯度≥98%，国家标准物质研究中心。 　　除有另外规定外，实验所用其它试剂均为分析纯。 　　实验所用水为蒸馏水。 　　1.3 色谱条件 　　色谱柱：Shimadzu VP-ODS C18 柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（体积比为80：20）；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；检测器：紫外检测器（UV-VIS DETECTOR）；根据保留时间定性，以峰面积定量。 　　1.4 方法 　　1.4.1样品处理 　　1.4.1.1 含蛋白质和油脂较多的固体食品，如酱卤肉制品、擂茶：称取均匀试样约10g（精确到0.01g）， 放入100mL容量瓶中，加水40mL，在沸水浴中加热15min，取出冷却，慢慢加入10mL乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液10mL，加入水至刻度，混匀，沉淀，静置，取上清液用干燥的快速滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。 　　1.4.1.2 不含或含少