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* 本周蛋白 * 图片……………………….. * 本周蛋白 * 本周蛋白 * 生理性蛋白尿 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定量 1.根据实验室条件选择合适的定量方法。 2.卫生部临检中心推荐双缩脲法和丽春红S法。 3.加强尿液蛋白质定量的质量控制非常必要！ 尿液蛋白质分类 SDS凝胶电泳 双向凝胶电泳 ??? ??? 三、尿液蛋白质的检验 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质分类：SDS凝胶电泳 SDS与蛋白质结合，消除了蛋白质分子中的 电荷差异，再通过聚丙烯酰胺的分子筛作用，将 蛋白质按分子量大小相互分离。 三、尿液蛋白质的检验 尿液标本 葡聚糖、PEG等 SDS凝胶电泳 染色、光密度扫描 1 2 3 4 Alb 小分子量蛋白 大分子量蛋白 1 肾小球性蛋白尿 2 肾小管性蛋白尿 3 生理性蛋白尿 4 混合性蛋白尿 三、尿液蛋白质的检验 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质分类：双向凝胶电泳 蛋白组学的重要技术，第一向基于蛋白质的等电 点不同进行分离，第二向则按蛋白质分子量的不同进 行分离。 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质分类 1.SDS凝胶电泳用于对尿液蛋白质进行分类。 2.双向凝胶电泳主要用于科学研究。 三、尿液蛋白质的检验 三、尿液蛋白质的检验 质量保证 分析前质量控制； 分析中质量控制：坚持室内质控、遵守SOP操作规程、注意实验过程中的影响因素； 分析后质量控制：完善的报告审核制度，结果不符合时及时分析原因。 生理性蛋白尿 病理性蛋白尿 四、尿液蛋白质检验的临床意义 肾前性蛋白尿 肾性蛋白尿 肾后性蛋白尿 功能性蛋白尿（functional proteinuria） 体位性蛋白尿 (postural proteinuria) 偶然性蛋白尿 (accidental proteinuria) 四、尿液蛋白质检验的临床意义 生理性蛋白尿 病理性蛋白尿 肾小球性 蛋白尿 肾小管性 蛋白尿 混合性 蛋白尿 溢出性 蛋白尿 组织性 蛋白尿 四、尿液蛋白质检验的临床意义 患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。 1.初步诊断为什么疾病？ 2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？ 病例 急性肾小管坏死 课堂小结 尿液标本 蛋白质定性 干化学试带法 磺基水杨酸法 蛋白质定量 染料结合法 比浊法 蛋白质分类 思考题 自主设计实验 加热乙酸法 干化学试带法 磺基水杨酸法 1 - + + 2 + - + 3 - - + 合成三种人工尿液，要求： * 改？怎么改？ * 改？怎么改？ * 改？怎么改？ * 生理性蛋白尿 * 生理性蛋白尿 1.蛋白质的胶体性质 　　蛋白质分子量颇大，介于一万到百万之间，故其分子的大小已达到胶粒1～100nm范围之内。球状蛋白质的表面多亲水基团，具有强烈地吸引水分子作用，使蛋白质分子表面常为多层水分子所包围，称水化膜，从而阻止蛋白质颗粒的相互聚集。　　与低分子物质比较，蛋白质分子扩散速度慢，不易透过半透膜，粘度大，在分离提纯蛋白质过程中，我们可利用蛋白质的这一性质，将混有小分子杂质的蛋白质溶液放于半透膜制成的囊内，置于流动水或适宜的缓冲液中，小分子杂质皆易从囊中透出，保留了比较纯化的囊内蛋白质，这种方法称为透析(dialysis)。 二、蛋白质的两性电离和等电点 　　蛋白质是由氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和羧基外，侧链中尚有一些解离基，如谷氨酸、天门冬氨酸残基中的γ和β-羧基，赖氨酸残基中的ε-氨基，精氨酸残基的胍基和组氨酸的咪唑基。作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子(zwitterion,净电荷为O)，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(isoelectric point,简写pI)。处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动。蛋白质溶液的pH大于等电点，该蛋白质颗粒带负电荷，反之则带正电荷。 三、蛋白质的变性 　　天然蛋白质的严密结构在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间结构被破坏，从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失，如酶失去催化活力，激素丧失活性称之为蛋白质的变性作用(denaturation)。变性蛋白质只有空间构象的破坏，一般认为蛋白质变性本质是次级键，二硫键的破坏，并不涉及一级结构的变化。 　　变性蛋白质和天然蛋白质最明显的区别是溶解度降低，同时蛋白质的粘度增加，结晶性破坏，生物学活性丧失，易被蛋白酶