杆状病毒表达系统(昆虫细胞的培养及杆状病毒滴度测定)精要.pptVIP

微量中和实验技术 PD50=-1.299的反对数=0.05=1/20 即1:20稀释的待检血清可保护50%的组织培养细胞不出现CPE 谢谢 注意事项： 待检血清需56℃灭活30分钟。 需重复测定抗体时，血清应分装后冻存，以免反复冻融。 细胞应处于对数生长期，严禁细胞过度生长或老化，细胞 活力≥ 95%。 4. 牛血清有中和病毒感染力的作用，实验过程中切勿将细胞 培养液与病毒稀释液混淆使用。 5. 病毒与抗血清混合，常规采用37℃作用1小时。但针对不 同耐热性的病毒，孵育温度和时间应有所增减。 6. 每份血清做3个生物学重复。 细胞免疫的检测 首先要完成淋巴的分离和体外刺激 包括脾淋巴细胞/外周血单核细胞的分离 脾细胞的分离： 2.将脾脏转入匀浆器中，加少量不完全1640，轻轻研磨。 1.处死的小鼠经消毒后，放置于泡沫板右侧卧固定，剪开左侧背腹交界处皮肤，分三套镊子/剪刀无菌取脾脏 3.静置，吸上清液入15 ml离心管中，1000rpm×10 min。 4.弃上清，加入5 ml的8.3g/l NH4Cl，静止5 min (去除红细 胞)，1000 rpm ×10 min。 5.弃上清，用不完全RPMI-1640洗涤，1000 rpm ×10 min。 6. 细胞计数，台盼蓝染色，要求细胞活性应在95%以上。 7.调整浓度为4×106 cell