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专题一　微生物利用及生物技术在食品加工中的应用 考点一　微生物的培养与应用 1．(2010·山东，34)生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化学燃烧的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如图)。 (1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用________、________方法从油料作物中提取。 (2)筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供________，培养基灭菌采用的最适方法是________法。 (3)测定培养液中微生物数量，可选用________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测________，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用________技术使脂肪酶能够重复使用。 (4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的________技术。 解析　(1)因为植物油不易挥发，不能选用蒸馏法提取，可以用压榨法、萃取法从油料作物中提取。(2)微生物的生长需要水、碳源、氮源和无机盐等，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源。培养基灭菌采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法。(3)测定培养液中微生物的数量，可选用显微镜直接计数法直接计数。提取的脂肪酶在应用于实验或生产之前，要先检测其活性，以确定其应用价值。固定化酶技术可以实现酶的反复利用，降低了生产成本。(4)在应用PCR技术扩增DNA片段时，DNA合成(延伸)时温度要控制在72℃，需要具有较强的耐热性的DNA聚合酶催化。 答案　(1)压榨　萃取　(2)碳源　高压蒸汽灭菌　(3)显微镜直接计数　酶活性(或：酶活力)　固定化酶(或：固定化细胞)　(4)PCR(或：多聚酶链式反应，聚合酶链式反应) 2．(2014·全国课标Ⅰ，39)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题。 (1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将________分解成________。 (2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成________色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。 (3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)： 注：“＋”表示有，“－”表示无。 据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是___________________________________________。 答案　(1)纤维二糖　葡萄糖　(2)红　透明圈 (3)不能　液体培养基不能用于分离单菌落　不能　培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌 1．微生物培养中的无菌操作技术 (1)常用消毒3种方法—— 消毒法、巴氏消毒法及化学药剂消毒法。 (2)常用灭菌3种方法 灭菌——接种环、接种针等金属器具；干热灭菌——主要针对玻璃器皿等； 灭菌——主要针对 等。 2．培养基制备与微生物纯化技术 3．常考微生物培养与分离中的“对照组”与“重复组” (1)确认培养基制备是否合格——设置未接种的培养基与接种培养基一起培养，若未接种培养基上无菌落生长，表明培养基制备合格。 (2)确认选择培养基的“筛选”作用——设置接种的普通培养基，与接种的选择培养基一起培养，若选择培养基中生长的菌落种类与数量明显少于普通培养基组别，则可表明选择培养基已起到了筛选作用。 (3)为增强实验的说服力和准确性，则需设置重复组，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 再悟高考 1．判断正误 (1)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养。 (2013·江苏卷，T18C)( ) (2)在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长。 (2011·重庆卷，T2B)( ) (3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法。 (2011·新课标全国卷，T39(2))( ) (4)在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌。 (2011·重庆卷，T2A)( ) (5)检测土壤中细菌总数实验操作中，确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数。 (安徽卷