多聚酶链式反应扩增DNA摘要.pptVIP

（一） 、PCR技术的原理 利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。 体外DNA复制的条件： 四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、 模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。 复制的方向：子链的5′端向 3′端延伸。 （二）、PCR的反应过程 反应周期 （二）、PCR的反应过程 以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率 （二）、PCR的反应过程 （1）变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链。 （2）复性：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 （3）延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A，T，C，G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 （1）PCR循环--变性 （1）PCR循环--变性 （1）PCR循环--变性 （2）PCR循环—复性 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 三、实验步骤： 四、操作提示： 操作提示 1．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。 2．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。 3．在微量离心管