5-氨基乙酰丙高效表达体系的建立及其应用.pdfVIP

摘 要 5--氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinicacid，ALA)，是四吡咯类化合物(例 如：亚铁血红素、卟啉、叶绿素和维生素B．：)的共同前体，也是调节四吡咯类物 质生物合成的关键代谢中间物，广泛存在于微生物、植物和动物细胞中。近年来， 发现ALA在农业上可用作杀虫剂、除草剂、病毒病制剂及生长调节因子；在医学 领域，ALA作为第二代光动力药物，可用于治疗各种癌症，且副作用小、疗效确 切。因此对ALA的工业化生产引起了学术界和产业界的重视。 酶基因，构建了高产5一氨基乙酰丙酸的工程菌，通过对工程菌培养条件的优化， 大幅度提高了ALA的产量。将胞外ALA应用于作物，发现外源ALA能有效提高作 物体内叶绿素含量及干物质重，同时提高了作物的抗逆性。 研究工作的主要创新点和进展包括： 载体pQE30分别经SscI和肌月矾II双酶切后连接，构成了原核表达载体 ALAS-pQE30。将表达载体分别转化￡coli 过比较3个重组菌ALA合成酶比活力及积累ALA的能力，确定重组菌￡coli M15(ALAS-pQE30)为优势菌株。 2．以重组菌￡coliM15(ALAS—pQE30)为研究对象，对其发酵条件进行了优 化，包括诱导剂、底物及抑制剂的添加量、添加时问及添加方式，同时研究了I’日J M15 歇式的向摇瓶中补加培养基能增大胞外浓度，经发酵放大的E．coli (ALAS-pQE30)过夜培养后胞外ALA积累量达到5．37919·一。 3．将发酵液采取高温处理或SDS变性后，低温保存能降低ALA的降解。且 存时也只降解29％。 素含量，同时叶片的比叶重得到很大提高，即外源ALA能提高植物的光合作用质 量、增加作物产量。而且经外源ALA处理后的烟草经霜冻与干旱胁迫后，其体内 POD和CAT活性提高，而MDA含量降低，证明外源ALA能明显提高烟草的抗逆性。 关键词：尼acidophilus；ALA：发酵条件优化；稳定性；霜冻胁迫；干旱胁迫 抗逆性 IJ Abstract 5-aminolevulinatethefirstcommon inthe acid(ALA)is precursor biosynthesis as of such andvitamin tetrapyrrolecompoundsheme，porphyrins，chlorophyllBt2， andalsoisa metabolicintermediateto the key regulatetetrapyrrolesbiosynthesis． ALAis in and hasbeen widelypresent microorganism，plantanimal，Recently,it foundthatALACanbeusedas andinsecticideaswellas biodegradable，herbicide factorin be Call usedfor growth·promotingagriculture．Moreover,ALA preventing and virus