嗜酸乳杆菌细胞肽聚糖的分离提取及其免疫活性的研究.pdfVIP

嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖的分离提取及其免疫活性研究 摘要 嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)是乳酸菌家族中的重要一员，它能 在肠道中定植，当达到一定数量时，能改善或调节肠道微生物菌群的平衡、增强 核生物细胞壁的特有组成成分。真核细胞中不含肽聚糖，因此肽聚糖成了真核生 物免疫系统识别的理想靶位。研究表明，高等真核生物体中含有若干肽聚糖识别 分子，这些活性分子通过不同的信号传导途径诱导释放免疫调控物质，从而露0激 免疫系统发挥免疫功能。目前，双歧杆菌细胞壁肽聚糖已被成功分离提取出来， 并被证明是一种新型的非特异性免疫增强剂。而嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖的相关 研究还鲜见报道。因此，在对嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖进行分离提取研究的同时， 结合生理活性试验证明其免疫活性，对深层次开发嗜酸乳杆菌微生态制剂及益生 菌免疫佐剂具有重要意义。 本文在筛选生长期短、产量大的嗜酸乳杆菌菌株，优化增菌培养基的基础上， 分别采用超声波法、溶菌酶法及三氯乙酸法分离提取嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖， 并通过生理活性试验证明得到的嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖具有抗肿瘤及免疫调 节功能，为嗜酸乳杆菌微生态制剂及益生菌免疫佐剂的研究和开发奠定了良好的 基础。实验内容及结果如下： 1．开展了菌株筛选及培养基优化的研究。通过对多株嗜酸乳杆菌菌株进行筛 选，得到了1株生长期较短、产量较大的嗜酸乳杆菌菌株【丑2；在此基础上进行 了增菌培养基的优化。使用优化得到的增菌培养基测定I．,a2的生长曲线，确定了 板菌落h-塑t，活菌数为3．8x109cfu／mL，是普通btRS培养基的5．4倍。 2．采用超声波法、溶菌酶法、三氯乙酸法分离提取I．a2细胞壁肽聚糖。其中 超声波法的最优组合为：超声功率400W、超声时间30rain、超声温度40C， 肽聚糖得率为10．2％；溶菌酶法的最优组合为：溶菌酶添加量4mg／mL，水浴温 度55℃，作用时间5h，pH值7，肽聚糖得率为10．o％；三氯乙酸法肽聚糖得率 为15．8％。通过多重比较，确定使用三氯乙酸法提取嗜酸乳杆菌1．．a2细胞壁肽聚 糖。 3．对得到的肽聚糖提取物的氨基酸组成进行了分析，其主要氨基酸组成天 冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸均为嗜酸乳杆菌肽聚糖上与N一乙酰胞壁酸羧 基连接的肽链上的氨基酸分子；同时测得肽聚糖提取物的氨基己糖浓度为 2．831mmol／g，磷含量为0．0319mg／g，分子量主要分布在30kD左右。 4．证明了La2细胞壁肽聚糖对荷瘤小鼠S-180肉瘤生长的抑制作用。嗜酸 S-180肉瘤的生长(P≤0．01)，并能极显著的提高荷瘤小鼠的脾指数及肾上腺指 数(P≤o．01)。 关键词：嗜酸乳杆菌。肽聚糖，免疫活性 Ⅱ Extractionand of in ImmunityActivityPeptidoglycan Abstact Asall memberoflacticadd caninldl)itin bacteria,LactolⅥciUus iI】叩吼tant acidophilas intestinaltract．rehencohostosubstantialarnotults．Lactobacillus acidophilusc龃improve讲 the thebala．nceofintestinaltract andrestrainformation regulate flora,sU℃ngthenbodyimmuulty tomor isals