枣果实总rna提取及其反转录技术体系的建立.pdfVIP

捅婴 枣(倒z功6w．血意加Mill．)是我国特有果树资源。枣果营养丰富，用途广泛，深受人们 喜爱。枣适应性强，抗旱、耐瘠薄、耐盐碱，是适于山区和盐碱地区栽种的理想经济树种。以无 核小枣和金丝小枣不同发育时期的果实为试材。建立适宜枣果实总RNA提取的方法及其反转录的 技术体系，为进一步进行枣果实cDNA_AFLP分析及有关的分子生物学操作，阐明枣无核突变体的 分子机理，并克隆枣果实无核突变体相关基因，通过基因工程培育优良的无核枣品种奠定基础。 研究主要内容如下： L试验在参照大量总RNA提取方法的基础上，设计了枣果实总RNA的提取方法，即改良SDs 法。通过比较改良cTAB法和本试验设计的SDs法对枣果实总RNA的提取结果，发现本研究设计 的SDs法提取总RNA的质量更高，效果更好。进一步通过对设计的sDs法优化，即重点研究了最 佳试材的用量、无水乙醇和异丙醇沉淀RNA效果的比较、Licl去除多糖的效果以及Licl和无水 乙醇沉淀RNA先后顺序不同对RNA的影响等方面，确定了枣果实总I{NA提取最佳技术体系，该体 系提取了金丝小枣和无核小枣不同时期的果实总RNA。 2．枣果实不同发育阶段RNA含量不同，发育早期阶段RNA含量高。 3．研究了无水乙醇、异丙醇沉淀IⅢA的效果，确定了最佳沉淀RNA的方法，即2．5倍体积的无 水乙醇效果最好。 4．建立了适合枣果实总RNA的纯化技术体系，确定了合适的DN∞e的用量，即40uL体系 中，DN嬲e的用量为10U。 L 5．建立了枣果实反转录合成cDNA技术体系。其中，反转录cDNA第一条链体系为：lOu 1 uL10mm01／uLdNTPs，2uL u 合成第二条链cDNA体系为：30HL体系中，含有10L第一条链反应混合物，3HLl0倍 lomm01／uLdNTPs，0．5uL DNA聚合酶I缓冲液，2uLD蚪Apolymer鹊eI(4u，HL)，1．5uL RNase HL u H(60U／uL)，3 10倍T4DNA连接酶缓冲液，0．2耻LT4DNA连接酶，9．8LddH20。 关键词：枣；果实；RNA提取；反转录；cDNA Isolation ofTotalRNAandEstabUshm蛆t ofReverse for Transcription system ChineseFruit Jujube Master Bin postgraduate：HaIl M萄or：Pomology Superviser：PengJian-ying AbstI谊ct chinese aIld fhlitin jujube(z拓拉埔淞，彬“妇MilL)isimportamspecificchina．nsfmitisfichin nu仃idonandloved itcan in awfIll ideal