枣愈伤组织诱导原生质体分离研究.pdfVIP

捅 要 本试验以冬枣组培茁叶片、嫩茎和冬枣黄蕾期的花药为材料研究了各材料诱导愈 伤组织的条件并以冬枣组培苗叶片、酸枣四倍体组培苗叶片和冬枣花药愈伤组织细胞 悬浮系为材料，找出了适合各材料分离原生质体的纤维素酶和离析酶的浓度、甘露醇 浓度、分离时间、离心速度。 1．冬枣组培苗叶片不适合用于诱导愈伤组织。适合冬枣组培苗嫩茎诱导愈伤组织 愈伤组织状态理想。适合冬枣花药愈伤组织诱导的培养基为 l也MS+TDZO。4mg¨PVP2．Omg凡。 9天进行原生质体的分离。时间太短愈伤增殖速度慢，形成的瓤生愈伤组织少；超过 10天，愈伤组织的颜色逐渐变褐，生命力降低，不适合分离原生质体。 增殖量大，并能够在继代两年后仍保持旺盛的再生能力。 4．冬枣组培苗叶片、花药愈伤组织细胞悬浮系都是分离原生质体的良好材料，适 酶。 5．适合四倍体酸枣组培苗叶片分离原生质体的酶液组成为O．6mo儿甘露醇 +l％MEs+109／L纤维素酶+4～59，L离析酶。 6．适宜花药愈伤组织细胞悬浮系分离原生质体的酶液组成为O．6moUI。甘露醇 +1％MEs十25玑纤维素酶。 7，纯化原生质体时合适的离心速度为lOlO“min，时间16111in；梯度离心时的转速 以870r／n血为宜，7～8min。速度过高或过低都会影响原生质体的产量和活力。 8．适宜枣原生质体分离的时问为16～20h，时间太短酶液作用不充分，时间太长 原生质体会发生破裂死亡。 关键词：叶片；花药；愈伤组织；原生质体 Studiesoncallusinductionand isolation protoplast on。．弛垂，^lfsJq，比6口MilL MaSter Xiao postFaduate：Liugua工19 Major：PomoIogy superviser：LjuMengjun Abstract Innlis leavesof and of budof study，p1柚tlctsDongZao、pl锄tlets“vigantheryeIlow wereusedasmaterialsto the treatconditio璐ofinducemem DonEZao callus，andplantletS of Ieaves leavesof cultureofanther DongZao，plantletssour{ujIlbetetraploid，sus口ension wereusedas research ofDongzao materialsto mefeasibleconditionsofprotopIast Cellulase“onozuka”R．10and R．10s’concentration、 isolation，including Macerozvme Mannital isolation concen仃ation．isolation廿meand soeed． 1．Plantlet1eavesof weren’tfeasibletoinduce of callus．Used