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水稻苗期部分旱胁迫早期应答基因片断获得及CDS扩增 摘 要 在我国，尤其是北方，干旱是影响作物生产的煨严重因素。虽然从五十年代起，抗；t机 理的研究一直是研究的热点，且各种抗早的形态生理指标被提出来。但这些指标在实际逆Hj 中效果并不理想．因而从分子水平上研究抗早机理不但非常必要、而且还非常迫切。 在分析以前干旱研究的经验教训丽．本研究采埘不同的研究思路和方法开展。同时．为 增加研究的实用性，本研究采刚目前在人田生产上应J；Ij的抗旱性较强的陆稻品种早稻297 为材料。取得的成果如下： 1． 本研究为避免研究干旱的众多影响因素，设计了一个温度、光j{{(和湿度都可控 的环境，以保证基因的变化由单一因素引起。虽然人工环境与犬田有许多差别。 但可作为研究干旱的一种摸式。 2． 以二叶一心期的水稻幼苗为材料．采_l_}j0．9％NaCI、15％PEG年IJ干旱三种方法处 理，于3小时取样，比较三种情况下获得的差异片断的异同，目的在于获墩干 早胁迫信号转导上游对干早胁迫应答、同时又对NaCI和PEG不廊答的基lN。 3， 对现有获得差异基因片断的方法进行了改进．删除了基因鉴定综台法中繁杂的 验证步骤，增加了扩增片断的长度．使方法更为简洁，同时假阳性得到进一步 降低。在直接干旱处理3小时的水稻幼苗中．通过简化的基因鉴定综合法得到 了只对干旱胁迫应答，而对0，9％Nacl和15％PEG不起反应的4个EST，赊1 个功能不能判别外．其余分别与果腔甲脂酶、二磷酸核酮糖羧化酶、锌结合蛋 白基因相关。 4． 根据基因家族的保守序列来设计引物进行RT--PCR的结果获得了7个只对干 旱胁追应答，而对0，9NaCl和15％PEG不起反应的EST，分别与1，5．二磷酸核 酮糖羧化酶、寡肽酶、天冬酰胺酶、脱落酸反应元件结合因子、 酸反应元件结台因子基因与植物抗旱相关。本研究表明．它们在植物胁迫3小 时即已表达。 5， 为了探索获得更经济、更方便的克隆基因全长的方法，尝试了对基因编码区 (cDS)的扩增．根据每个基因的第一个翻译起始密码为AUG的原理．我们设计 引物对基因的CD$进行扩增。对基因的CDS扩增尝试表明，方法虽有许多缺 ‘ 陷和许多尚需政进的地方，但很有可能获得基因的CDS。 关键词：水稻。早胁迫．应答基因，CDS Abstract In inNorth fhctors isoneofthemostserious China,drouIght China．especially limitingcrop on ahot research resistantmechanismhavebeen across productivity．Althoughdrought spot 50 alotof for and indexes resistancehavebeen years，and morphologicalphysiologicaldroufght put theseindexesarenot in oll resistant forward，but rehash mechan