甜瓜果实蔗糖合酶基因(ss)的克隆、表达分析及遗传转化.pdfVIP

哪Y iiii●l Ⅲ…7， 川8㈣6Ⅲ5㈣6㈣0 英文缩略词 目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 Abstract………………………………………………………………………………………………··3 1引言…………………………………………………………………………………………………5 1．1甜瓜果实糖的变化及关键代谢酶………………………………………．5 1．1．1甜瓜果实发育过程中糖含量的变化…………………………………．5 1．1．2甜瓜果实不同部位糖分的分布………………………………………·6 1．1．3蔗糖代谢相关酶………………………………………………………．6 1．2蔗糖合成酶基因的研究进展……………………………………………．8 1．2．1蔗糖合成酶(SS)的基本性质………………………………………·8 1．2．2目前公布的SS基因家族………………………………………………9 1．2．3SS基因的生物学功能…………………………………………………10 1．2．3．1影响库强、调控输入蔗糖多少和代谢蔗糖的能力………………II 1．2．3．2参与细胞分化与纤维细胞壁合成…………………………………1l 1．2．3．3调节淀粉合成………………………………………………………12 1-2．3．4提高植物抗逆性……………………………………………………12 1．2．4 SS基因的遗传转化……………………………………………………13 1．3反义技术的应用…………………………………………………………13 1．3．1反义基因的基本概念…………………………………………………13 1．3．2反义RNA技术的作用机制…………………………………………-·14 1．3．3反义RNA技术在植物中的应用……………………………………15 6 1．4甜瓜组织培养与遗传转化研究进展……………………………………1 1．4．1转化方法………………………………………………………………16 1．4．1．1农杆菌介导的基因转移……………………………………………16 1．4．1．2外源DNA直接导入………………………………………………17 1．4．1-3种质系统的基因转移………………………………………………18 1．4．2甜瓜的组织培养………………………………………………………19 1．4．2．1甜瓜再生体系建立的影响因素……………………………………19 1．4．2．2甜瓜组织培养国内外研究现状……………………………………22 1．4．2．3对甜瓜的遗传转化…………………………………………………23 1．4．3转基因植株的鉴定……………………………………………………25 1。4．4存在的问题与展望……………………………………………………25 1．5研究目的与意义…………………………………………………………26 2材料与方法………………………………………………………………·27 2．1材料……………………………………………………………………………………………”27 2．1．1材料、试剂及仪器……………………………………………………27 2．1．2再生体系培养基………………………………………………………”27 2．1．3PCR引物…………………………………………………………………………………“29 2．2试验方法………………………………………………………………“29 2．2．1甜瓜果实总RNA的提取……………………………………………·29 2．2．1．1提取KNA所用器皿的处理及溶液配制……………………………29 2．2．1．2异硫氰酸胍一酚一氯仿一步法步骤………………‰……………“30 2-2．2甜瓜蔗糖合成酶(SS)基因的克隆…………………………………30 2．2．2．1 o竹．婚J基因中间片段的克隆………………………………………·30 2．2．2．2 CmSSI基因37端的克隆……………………………………………31 - 2．2．2．3 CmSSI基因5’端的克隆……………………………………………31