甘薯黑斑病菌(eratocystis fimbriata ellis.et halsted)分离鉴定及基因组文库构建.pdf

摘要 甘薯是世界上重要的粮食、饲料和工业原料用作物，在世界粮食生产中总产排列 第七位。甘薯黑斑病是为害甘薯最普遍而严重的病害，该病在世界上的许多地区均有 发生，在我国每年由甘薯黑斑病造成的甘薯产量损失在10％左右。由于甘薯黑斑病是 一种传播途径较多的顽固性病害，天然存在的高抗黑斑病菌的材料十分稀少，因此通 过常规育种手段选育抗病甘薯品种较为困难，目前大多采用薯块储藏时药剂浸种的方 法防治，而利用生物技术手段创造抗病材料获得抗病品种是防治该病害最经济和有效 的方法。本研究主要内容为甘薯黑斑病菌的分离纯化和利用lambda噬菌体构建了甘 薯黑斑病菌基因组文库，为下一步筛选甘薯黑斑病菌无毒基因，构建甘薯抗病基因的 转基因表达载体奠定基础。 本研究第一部分从病薯中分离得到的甘薯黑斑病菌通过甘薯黑斑病室内鉴定，调 胜利百号、徐薯18和52-，45为参试对照种，结合对照品种的抗性表现，确定76个不同 种。 ． 本试验第二部分从收集到的病薯中分离纯化黑斑病菌，通过方法摸索提取高质量 的基因组DNA，选择合适的限制性内切酶BamHI进行部分酶切使之成为适宜的片 外源DNA片段与载体DNAQ．噬菌体载体，kDASHIIVector)进行连接，经体外包装， 转染细菌，