基因工程的主要技术原理(植物基因工程)创新.ppt

如果要研究两个蛋白之间有无相互作用，可以把这两个蛋白分别与DB和AD形成的融合蛋白。 与DB 融合的蛋白称为“诱饵”(bait)，与AD融合的蛋白称为“猎物”(prey)。 如果这两个蛋白能发生相互作用, 这两个融合蛋白上的DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子, 从而激活报告基因(reporter gene)的转录与表达。 通过检测报告基因的表达产物, 可判别“诱饵”和“猎物”这两个蛋白质之间是否存在相互作用。 酵母双杂交的载体质粒 DB载体质粒 AD载体质粒 1. 分别构建BD和AD融合蛋白载体 2. 分别将重组载体转化酵母菌细胞 3. 对酵母转化子进行自激活检测 4. 将重组载体共转化酵母菌细胞 5. 检测报告基因表达产物 6. 分析酵母双杂交实验结果 BD AD BD AD BD AD 酵母双杂交操作主要流程 是一种细胞内蛋白质相互作用研究技术，比体外的蛋白质相互作用技术更接近生物体内的真实情况。 基于基因重组技术和分子遗传学的原理，更便于观察和检测实验结果。 酵母菌是一种低等真核微生物，能反映真核生物的基本生命现象和规律。 4. 酵母菌生长迅速、容易培养，便于进行高通量、大规模的组学研究。 酵母双杂交技术的优点 1. 假阳性：自激活、多因子参与…… 假阴性：毒性蛋白、膜蛋白、难表达的蛋白…… 低等真核细胞