基因工程第四章基因工程的主要技术原理创新.ppt

作业：P95 1、3、6、7、8、11、12 7. PCR技术的应用 （1）扩增某一段DNA 从基因组中扩增； 从载体上扩增； 组织样本原位扩增； 微量残留DNA扩增； 分析模板序列； 在基因的某处引入核苷酸突变（缺失、重复、插入、替换等）。 （2）基因的体外诱变 技术关键： 利用引物的5‘端序列不要求与模板严格配对，设计引物时引入突变序列。 设计引物定点诱变 利用6bp长度的随机序列引物扩增细胞中的总DNA，将会得到许多非特异性产物，反映了该引物序列在基因组中的分布状况。 （3）基因组的比较研究 比较不同物种之间的基因组特征和相似性。 类似于限制性内切酶片断长度多态性（RFLP）分析，因而也称为随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。 RAPD (Random amplified polymorphism DNA) 1970年人们就有足够的理论知识来提出目前所用的快速DNA序列分析法。但当时在认识上和技术上存在两个问题： 当时没有能把不同长度的核苷酸片断分离开的技术。 当时的分析思路局限于RNA序列分析法。 第五节 DNA序列分析 （1965年Cornell大学的S.W. Holley等首次测定了75bp的酵母丙氨酸tRNA全序列。使用的是降解片断法）。 Sanger等1977年发明。 一、双脱氧链终止法 Frederick