基因扩增技术(PCR)创新.pptVIP

Polymerase chain reaction又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，在模板DNA，引物（模板两端的已知序列）和四种脱氧核苷酸存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。 PCR技术是由Cetus公司和加利福利亚大学1985年联合创造的，主要贡献者为Kary B mulis和HeneryA、Erlich。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，能检测每10万个细胞中仅含一个靶DNA分子的样品。因而发明人Kary B、mulis获1993年诺贝尔化学奖。 PCR的种类 RT-PCR 反向PCR 不对称PCR 多重PCR 巢式RT-PCR 实时定量荧光PCR PCR温度循环参数 变性(denature)温度和时间 模板DNA的变性：模板DNA双链在93-96加热2’-10’解离；经 PCR扩增形成的双链DNA在93-96°C 加热30”-1’。 退火(anneal)温度和时间: Tm-5°C 温度降至55C左右，特异引物与模板DNA单链配对结合。 延伸(extend)温度和时间： 72°C 1000碱基/分钟 在TagDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模 板，引物为起始点，按碱基配对原理合成一条新的复制链。 循环数 在