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第三节 血涂片制备与染色 一 血涂片的制备 （一）载玻片要求 （二） 血涂片制备方法 一张良好血涂片的标准是： 厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、边缘整齐、两侧及两头留有空隙。 几种血涂片效果比较 血涂片分布不均主要原因： (1)推片边缘不齐(A) (2)用力不均(B、G) (3)载片不清洁(F) (4)角度太大（C、D）(5)血滴散开不合格（E、H） 二 血涂片的染色 （一）染料： （二）染色方法： 1．瑞氏染色法 染色原理 染料组成： 酸性染料伊红（eosin, E-） 碱性染料亚甲蓝（methylene blue, M+；又名美蓝）组成复合染料。 M+CL- + Na+E - → ME + NaCL 甲醇：溶解染料ME；固定细胞的形态；提高对染料的吸附作用。 2．染色原理 物理吸附、化学亲和 染色影响因素： （1）pH对细胞染色的影响： 细胞各种成分多属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定。 在偏酸时正电荷（H＋）增多，易与伊红结合，染色偏红。 在偏碱时负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。 （2）染料贮存时间愈久，染色效果愈好。 染液贮存，必须加塞，以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸。 （3）加入甘油,防止甲醇挥发，染色清晰。 2．吉姆萨染色法 染色原理： 吉姆萨（Giemsa）染料由天青、伊红组成，其原理和瑞氏染色基本相同，但吉姆萨染色法对细胞核着色较好，结构显示更清晰，而对胞浆和中性颗粒则染色略显不足。 3．瑞-吉姆萨染色 【原理】 将瑞氏染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞氏和吉姆萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞氏和吉姆萨染色法的优点。 【质量保证】 （1）瑞氏染液质量 （2）染色时间与染液浓度 （3）染色过程 （4）冲洗染液 （5）脱色与复染 第二章 血液一般检验 第一节 红细胞检查 一、红细胞计数 red blood cell, RBC Erythrocyte, Ery 起源于骨髓造血干细胞（colony forming unit-spleen，CFU-S） 主要生理功能：通过细胞内的血红蛋白来实现的。 检测原理： 1．手工显微镜法 2．血液分析仪法 方法学评价：优缺点及适用范围 质量保证： 1. 避免技术误差 2. 纠正仪器误差（器材、稀释液） 3. 缩小分布误差（计数域误差） 红细胞计数 2ml稀释液 充分混匀 10ul血液 充池、静止 镜下计数 计算：RBC/L=N×5×10×106×200 Neubauer计数盘 3mm WBC WBC WBC WBC 1mm 排除异常标本的干扰 （1） 计数红细胞时，同时计入了白细胞和网织红细胞，严重贫血时甚至计入了有核红细胞。 白细胞数量过高（＞100×109/L） 时，则需要对计数结果进行校正。 （2）自家凝集素和球蛋白的影响 缩小计数域误差的有效方法就是尽量扩大计数范围和数量，尽量将CV控制在5%以内。根据Poisson公式推断，欲将误差控制在5%以内，至少需要计数400个红细胞，因此要求计数5个中方格的红细胞。 4．积极搞好IQC及EQA 1. 自我控制： 如果5个中方格所计得红细胞数目之间相差20个以上，则应重新充池计数。 红细胞数量正常的标本，两次红细胞计数相差不得超过5%。 变异百分数评价法 适用于人数较多时（30人）或市、区集体考核 两差比值评价法： 双份计数标准差评价法： 参考值：