嗜线虫致病杆菌j菌株抗菌蛋白的分离纯化.pdf

嗜线虫致病杆菌BJ菌株 抗菌蛋白的分离纯化 摘 要 昆虫病原线虫共生菌属于肠杆菌科、革兰 氏阴性菌，包含两个属 一一Xenorhabdus 和 Photorhabdus， 分 别 与 Steinernematidae 和 Aeterorhabditidae科的昆虫病原线虫互惠共生。已有研究揭示其代谢产物有很 好的杀虫、抑菌、抗癌等生物活性。这些特异的生物学功能使昆虫病原线虫共生 菌己成为一类新型的具有开发潜力和应用前景的生物资源。本论文以9株共生菌 为材料，通过对黄瓜疫霉菌的抑菌活性研究，发现我室从小卷蛾斯氏线虫 (Steinernemacarpocapsae)分离的BJ菌株发酵液中的粗蛋白具有较高的抑菌作 用，后进一步对其产抗菌蛋白的发酵条件和粗蛋白的性质进行了研究，并分别从 发酵液和菌体本身纯化出抗菌蛋白，现将主要研究结果总结如下: 1.对BJ菌株发酵液采用不同饱和度硫酸钱沉淀，并采用不同的培养时间、不同 的培养基和不同的培养基起始pH值进行培养，检测其发酵液粗提物的抗菌活 性，得到了以6096-85%袍和度的硫酸钱沉淀的粗蛋白抑菌活性最大，抗菌蛋 白产生的最佳条件为:28C，转速 180r/min在pH=7.2的TSB培养基中振荡 培养48小时。 2.利用60-85%饱和段硫酸钱盐析，获得粗提蛋白。100℃处理30min抑菌活 性损失不大，表明其耐高温;对胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K不太敏感;在 较广PH范围内的比较稳定，在pH=8.0时活性最高。 3.采用抑菌活性检测和SDS跟踪检测，通过QFastFlow离子交换层析和 SephacrylS-200HR凝胶过滤柱层析等方法从BJ的发酵液中纯化了抗菌蛋 白，通过SDS电泳分析，确定该蛋白质的分子量为17KD左右。 4.BJ菌株菌体破碎后经脱盐柱、阴离子柱层析及分子排阻层析分离到有抗性的 抗菌蛋白，其活性比胞外蛋白要小，聚丙烯酞胺凝胶电泳表现单一条带，分 子蛋约为37KD左右，比胞外蛋白分子量要大，该蛋白与胞外蛋白一样具有热 稳定，对蛋白酶不太敏感，在较广pH范围内的比较稳定。 关键词:嗜线虫致病杆菌叮菌株，抗菌蛋白，纯化，抑菌活性 t IsolationandPurificationofAntimicrobial ProteinfromXenorhabdusspp.BJ Abstract XenorhabdusandPhotorhabdusareharboredassymbiontsinthe intestineoftheinfectivejuvenilestageofnematodesbelongtothe familiesSteinernematidaeandHeterorhabditidaerespectively,theformer reseachsuggestedthattheirfermentationproducthasinsecticidal activities,antibacterial,antifungaIandantitumor,thesespecific biologicalfuctionmakesymbiontsbacteriumakindofneotypeorganism resourewithdevelopmentpotentiaLinthispaper,throughresearchof inhibitingactivityagainst行tophthara melonisKatsurainnine symbiontsbacterium,Xenorhabdusspp.双大thatisolatedfromSteinernema carpocapsaebyourlaboratory，wasfoundtohashigherantagonistic activities,thenfermentationfactorsthatinfluenceantagonistic activitiesofXenorhabdussppBJcrudeproteinsan