影响犊牛和成年体外受精效果主要因素研究.pdf

摘 要 本研究系统地探讨了影响成年牛和犊牛体外受精效果以及诱导犊牛卵泡发育效 果的诸多因素，建立了一套比较完善的体外受精的操作体系，并且，初步搭建了诱导 犊牛卵泡发育以及犊牛卵母细胞体外受精平台，为今后继续深入研究提供了良好的技 术支持。 以屠宰场卵巢为试验材料，通过抽吸法采集卵母细胞，分别研究了卵泡液（Bovine Follicular Fluid ，BFF ）对卵母细胞成熟效果的影响、洗涤精子时离心速率对精子处理 效果的影响、不同培养方法、不同培养环境以及果糖代替葡萄糖对胚胎发育的影响。 试验结果表明：添加10%血清组与添加10%血清+10%BFF 组的极体率、卵裂率以及 囊胚率差异均不显著（80.0% vs 76.7%；55.8% vs 56.3%；20.69% vs 21.4% ）（P0.05 ）， 但是，这两组的各项指标均显著好于对照组（50.0%；32.0% ；12.5%）（P0.05 ），数 据显示添加 10% BFF 组受精卵后期发育要好于未添加组。在对精子进行离心时， 750rpm 和 1000rpm 对精子损伤度较小，并且受精卵卵裂率均显著高于 1500rpm 组 （43.5% ，52.1%，26.5% ，P0.05 ）。750rpm 和1000rpm 组统计学上差异不显著，但 是后者卵裂率要高于前者（43.5% vs 52.1% ）。两步法培养组和三步法培养组囊胚率差 异虽然不显著（28.2% vs 28.9% ，P0.05 ），但是后者卵裂率要显著高于前者（59.2% vs 50.0%，P0.05 ）。以5%CO +空气为对照组，研究卵丘细胞共培养和90%N ，5%CO ， 2 2 2 5%O 对胚胎发育的影响，结果表明三个试验组中卵裂率差异均不显著（44.3% ，50.8% 2 and 48.4% ，P0.05 ），共培养和混合气组的囊胚率差异不显著（32.3% vs 30.0% ， P0.05 ），但是均显著高于5%CO +空气组（P0.05 ）。对第8d 囊胚进行双重染色时， 2 以Triton X-100 处理60～70s 时效果最好，内细胞团（ICM ）细胞数与细胞总数比例 约为0.33 。以1.5mM 果糖代替葡萄糖后，两者卵裂率（62.2% vs 60.7，P0.05 ）与囊 胚率（32.0% vs 29.7%，P0.05 ）差异均不显著，但是，数据显示前者ICM 细胞数和 滋养层（TE ）细胞数均高于后者（43.6 vs 40.2 ，99.3 vs 89.9 ）。 在诱导荷斯坦犊牛卵泡发育及体外受精研究试验中，分别从日龄、培养条件和供 体个体差异三个方面对4～9 周龄犊牛JIVET （Juvenile In Vitro Embryo Transfer ）技 术的影响进行了初步研究。试验结果如下：不同日龄的 10 头母犊激素诱导卵泡发育 后，30～40d 母犊平均获卵数为31.8±9.75 枚，46～63d 的母犊平均获卵数为21.8±11.67 枚，二者差异不显著（P0.05 ）；在体外成熟培养24h 后，犊牛第一极体排出率与成 年牛差异不显著（76.7% vs 82% ，P0.05 ）；犊牛胚胎在低氧(5% CO , 5% O ,90% N ) 2 2 2 条件下和与颗粒细胞共培养条件（5%CO2 ，95%空气）下卵裂率分别为 48.5%和 54.1%，二者差异不显著（P0.05 ），但是桑椹胚率差异显著（0% vs 15.2% ，P0.05 ）， 所得胚胎未能移植和得到后代；供体间个体差异很大，70% (7/10) 的个体对激素诱导 反映良好。 关键词：犊牛；成年牛；体外受精；卵泡发育 Study on the effect of in vitro fertilization in calf and cow