昆虫围食膜蛋白体对杆状病毒感染性的影响.pdfVIP

中文摘要 围食膜是昆虫中肠分泌的一层特有非细胞结构，由不含糖蛋白、糖蛋白、蛋白 多糖和几丁质组成，是昆虫中肠细胞抵御随食物摄入的病原微生物入侵的第一道天 然屏障。许多研究表明，几丁质酶、颗粒体病毒增强蛋白、荧光增自剂等生物或化 学因子能够破坏围食膜结构的完整性，可显著的增加杆状病毒或其他病原物的感染 性。所以，任何扩大围食膜孔洞，够破坏围食膜结构完整性的因素都可能提高病毒 的感染性。相反，堵塞、封闭或减小围食膜的孔隙可能会得到相反的结果。基于此 认识，我们用荧光增白剂解离甜菜夜蛾幼虫围食膜蛋白，制备抗体，以此研究昆虫 围食膜蛋白抗体对重组杆状病毒感染性的影响。 在离体条件下，以1％荧光增白剂FB．28解离适龄甜菜夜蛾幼虫围食膜，用所制 得的围食膜蛋白为抗原，选体重2～3公斤的健康雄兔进行免疫。全程注射四次， 首次免疫4周后加强免疫，加强免疫每次间隔2周。每次免疫抗原剂量约15叫g。 首次免疫时，抗原液加等体积完全福氏佐荆，混匀乳化后，进行皮下少量多点注射 而获得抗血清。再用抗血清同时加入4种蛋白酶抑制剂(o．和∥m1咖pcptin，1肛g／ mⅡlol／l mlP印statin1ED峨1mmol／lPMSF)涂在昆虫饲料上喂食316龄(三龄后16 小时)及40龄(四龄初)的甜菜夜蛾，在喂食O小时，2小时，4小时，6小时后，分别 用浓度为1．55×10。7PIBs，ml的重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 未添加光增白剂和未喂食抗体的)，进行生物测定。生物测定结果显示：以抗血清 喂食3”龄幼虫后，随着接种时问的推迟，病毒对幼虫的致死率逐渐降低，而没有 喂食抗血清的两组死亡率都大致分别维持在37．8％和80％左右；在对40龄幼虫进 行毒力测定时，随着接种时间的推迟，病毒对幼虫的致死率都逐渐降低，但喂食抗 血清的两组比相应的未喂食抗血清的两组死亡率都要低。 在喂食抗体4小时后用病毒感染3龄末甜菜夜蛾幼虫其LC50为6．19×109 PIBs／ml，而单剂感染甜菜夜蛾幼虫的LGo为1．56×107PIBs／ml，喂食抗体后LBo 末甜菜夜蛾幼虫其Lc50为1．04×106 Pms，ml，喂食抗体后Ll：50提高25倍。 本实验研究结果显示，喂食抗血清与感染接种的时间间隔越长，病毒对幼虫的 致死率逐渐降低，而且光增自剂的增效作用水平亦下降，这可能是当昆虫喂食抗血 清后，抗体与围食膜蛋白发生免疫反应形成抗原抗体复合物，从而堵塞了围食膜上 的孔洞，且随着时间的延长，封闭程度越高，一方面，降低了围食膜对病毒的通透 性；另一方面，可能也影响了光增白剂与围食膜蛋白的接触，从而阻止其对围食膜 蛋白的解离，进而使光增白剂的增效作用降低。 关键词：甜菜夜蛾；围食膜；光增白剂；抗血清； 重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 Abstract me 11le a of insect pe曲叩hicn衄b枷e口M)isn∞cellul缸inner．tube·l溉1iniIlg tlIat∞nsistsofchitiⅡmiaof—bms蠲sodated nlidgut acb勰a m锄1b砌ethat of prote0百yca珊．It semipc瑚％blc regIllat髂也cpa鹊age molecul既be“嘲mthe lum锄缸d scnre够abaIri盯t0 midgutcpiIhcm柚l柚d may studiesd鼬∞straled也atorch啪icalfaclofs pathogenicm抵rgaIlisms．M蛆y physical such nuoresccnt as幽恤髂e，∞