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玉米大斑病菌原质体制备、再生及根癌农杆菌介导的转化研究
摘 要
／
替照射三种光照处理对玉米大斑病菌产孢的影响。(结果显示，在BCM产孢培养基上(培养
08
l一，
。
个／IHl。其中，光照对玉米大斑病菌产孢的影响较为明显。j
本试验研究了菌龄、培养基、酶系统和酶解时间、稳渗剂对玉米大斑病菌原生质体制各
／
的影响及稳渗剂对原生质体再生的影响。黠果显示，合适的原生质体制备条件为：以Fries
MNaCI为稳渗剂，l％的溶壁酶、1％崩溃
液体培养基培养玉米大斑病菌分生孢子24h，0．7
106个原生质体；
酶和l％蜗牛酶3种酶混合使用酶解菌丝5h，O．59湿菌丝可以获得2．96X
原生质体在以蔗糖为稳渗剂的培养基中的再生率最高，可以达到7．53％。其中酶系统的选择
L一、，
对玉米大斑病菌原生质体的制备有很大的影响。j’
本试验还探讨了根癌农杆菌EAHl05介导转化玉米大斑病菌分生孢子的可能性。衔与农
杆菌共培养2天的玉米大斑病菌分生孢子转移至含有潮霉素(100lag／m1)的选择性培养基上，
5．7天后出现初始转化体。5X105个孢子最多可以获得75个初始转化体，共获得187个初始
转化体，其中9个初始转化体在不含潮霉素的PDA培养基上生长表现异常。但在进行二次
鉴定时，所有初始转化体在100pg／ml潮霉素的PDA培养基上均生长缓慢。随机选取30个
初始转化体提取基因组DNA，用特异性引物进行扩增，没有扩增出目的片段。卜一～7，一一一
／
关键词：玉米大斑病菌原生质体根癌农杆菌转化
111
Abstract
The
effect
ofthemedia and
PDA，CM，BM，BCM，2012 12h
25C，lightoffluorescent,dark
’
NuVand turns
12h of
fluorescent
by light onthecondial of肪砌fhⅢfmfcⅢ
production
0109_8were
studied·Theresults
indicated
thatthe conditionfor
optimum condial was
production
thatthe
strain
illumin
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