细胞因子对牛体受精胚胎细胞凋亡的影响.pdfVIP

摘 要 本研究通过在牛卵母细胞成熟液和胚胎发育液中添加不同浓度的表皮生长因子 （EGF）和半胱胺（CYS），比较其对牛卵母细胞成熟和胚胎发育的影响，利用TUNEL 检测法，检测了不同处理条件下胚胎细胞的凋亡情况。为牛卵母细胞和胚胎体外发 育的提高提供理论基础。研究结果如下： 试验一，研究了牛体外受精胚胎在不同发育阶段的细胞凋亡情况。结果表明， 对于牛体外受精胚胎，凋亡信号最早出现于16 细胞期，随着胚胎的发育，凋亡发生 比率也增加。16 细胞凋亡率为26%，桑葚胚凋亡率为83%，囊胚为97%,扩展囊胚和 孵化囊胚为100%。在囊胚阶段，细胞凋亡指数也随发育进行呈现上升趋势（囊胚凋 亡指数为0.031，扩展囊胚为 0.066, 孵化囊胚为0.105）。 试验二，比较不同浓度EGF 或CYS 对牛卵母细胞成熟的影响。结果表明50ng/ml EGF 显著提高卵母细胞的卵裂率。说明EGF 对卵母细胞成熟有促进作用。在成熟液 中添加CYS 对卵母细胞卵裂率和囊胚率没有显著影响，但50ng/ml 浓度EGF 和100uM 浓度CYS 处理组的囊胚凋亡指数都显著低于对照组(0.057,0.058 v. 0.071)，说明 成熟液添加适当浓度EGF 或CYS 能够显著提高牛卵母细胞的质量。 试验三，比较了在牛胚胎发育液中添加不同浓度EGF 或CYS 的效果。结果表明 EGF 对牛胚胎体外发育没有明显影响。在胚胎发育液中添加100uMCYS 可以明显提高 胚胎发育能力，囊胚率显著高于对照组 （36.5 v. 29.4,P0.05），囊胚的凋亡指数 显著低于其他组(0.058 v. 0.069,0.070,0.071,0.073, P0.05)。说明CYS 对牛胚 胎体外发育有明显促进作用。 试验四，比较了在牛卵母细胞成熟液和胚胎发育液中同时添加EGF 或CYS 的效 果。结果表明，同时添加EGF 或CYS 对牛卵母细胞的成熟及胚胎的发育没有产生叠 加效应。 以上结果表明，（1）牛体外受精胚胎，凋亡信号最早出现于16 细胞期，随着胚 胎的发育，凋亡发生比率也增加。（2）EGF 和 CYS 可以促进卵母细胞成熟。（3）EGF 对牛胚胎体外发育没有明显影响。CYS 可以提高牛胚胎体外发育能力。（4）在成熟 液和发育液中同时添加EGF 和CYS 可以提高牛卵母细胞成熟和胚胎的发育，但不产 生叠加效应。 关键词：牛；体外受精胚胎；细胞凋亡；细胞因子 Effect of Cytokines on Cell Apoptosis of Bovine In Vitro Fertilized(IVF) Embryos Abstract In this study, development of oocyte and embryo of bovine were examined after epidermal growth factor (EGF) and cysteamine (CYS) were supplemented in in vitro maturation medium and embryo culture medium, cell apoptosis of embryo under different treatment conditions were detected using TUNEL fluorescence method . The purpose of this study is to improve bovine oocyte maturation and embryo development . The results are as follows: In experiment one, cell apoptosis of bovine in vitro fertilized embryo at different developmental stages were detected. The results showed that apoptosis