西瓜转双价抗病关基因的研究.pdfVIP

摘 要 lanatus)是世界上重要经济作物之一。由尖孢镰刀 西瓜(Warermelon，Citrullus 菌西瓜专化型(Fusariumoxysporumf．sp．niveum)引起的西瓜枯萎病是西瓜生产中的限 制性因素，对西瓜枯萎病的防治，世界各国采用不同途径，蕴痘窟登被认为是最为经 济有效的手段。植物遗传转化技术转抗病相关基因为植物抗病育种开辟了新途径。 几丁质和B。l，3葡聚糖是绝大多数真菌菌丝体细胞壁的主要成分，几丁质酶和 B—l，3葡聚糖酶分别催化几丁质和f3—1，3葡聚糖的降解，因而利用几丁质酶和B．1，3 葡聚糖酶能够抑制真菌生长。本研究通过农杆菌介导法和In-planta两种方法，向西瓜 中导入几丁质酶基因和13．1,3葡聚糖酶基因，利用基因工程的手段选择培养转基因的 抗病新品种。 ／本研究的主要结果如下： 1．不同的细胞分裂素种类，6-BA和ZT，以及不同细胞分裂素浓度对予叶外植体 分化再生有影响。在相同的细胞分裂素浓度条件下，不同细胞分裂索种类对外植体的 分化再生能力存在极显著的差异(『O．01)，外植体在含6-BA的培养基中平均分化再 生能力小于在含ZT的培养基中平均分化再生能力；在相同细胞分裂素条件下，不同 细胞分裂素浓度对外植体的分化再生能力存在极显著的差异(p=O．01)。细胞分裂素浓 化再生培养基(分化频率r=85．76％士0．31％)。 绿变枯、叶片发白，最后死亡。而大约30％转化外植体在含卡那霉素100m∥L的MS 培养基上2w-3w后仍保持绿色，并分化出再生芽。 3．培养条件对转化率影响较大，经过预培养的子叶外植体，其分化率(F11．70 ％)明显高于未经预培养处理的子叶外植体分化率(1-=6．67％)。同时，适当的暗处理 能有效促进农杆菌感染的外植体的分化率，经过暗处理的外植体的平均分化频率为 11．76％，而直接进行光照处理的平均分化频率仅为6．60％。 4．含激素IAA的生根培养基中，西瓜再生芽的生根较快，但长出的根粗短、脆 弱，移栽过程中损伤较多：而在基本培养基中，再生芽的生根较慢，长出的根细长， 韧性较强，移栽成功率较高。 5．本研究通过根癌农杆菌介导法转化西瓜受体HW．1，共得到34株卡那霉素抗 性植株，对34株再生植株进行PCR检测，其中23株为转基因植株。转基因植株的抗 病性鉴定结果显示有7株转基因植株表现出抗病性的明显增强。／∥ 关键词： 西瓜西瓜枯萎病几丁质酶基因葡聚糖酶基因遗传转化 抗病性鉴定 Abstract in lanatus)isoneofthemost economic the Watermelon(Citrullus important crops Fusarium oneofthemost world．Fusariumwilt，caused oxysporumLsp．niveum，is by worldwide．Differentcounlriesdifferentin diseasesofwatermelon ways serious adopt the is that resistantcultivarsis mosteffective thewiltdisease．It breeding controlling proved of