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龟纹瓢虫热休克白基因hsp70和hsp90的克隆及表达研究
目 录
目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………．．III
1．前言…………………………………………………………………………………………………………………………一l
1．1热休克蛋白的研究概况…………………………………………………………………．．1
1．1．1热休克蛋白的发现及分类……………………………………………………………1
1．1．2热休克蛋白基因的表达调控…………………………………………………………1
1．1．3
Hsps蛋白的结构特性…………………………………………………………………2
1．1．4
Hsps与昆虫生长发育的关系…………………………………………………………3
1．1．5
hsps与昆虫耐热性的关系……………………………………………………………4
1．1．6昆虫在化学农药胁迫下的研究进展…………………………………………………4
1．2龟纹瓢虫的研究现状……………………………………………………………………．5
1．3本实验研究目的及意义…………………………………………………………………．5
2．材料与方法……………………………………………………………………………………7
2．1虫源及饲养方法…………………………………………………………………………．7
2．2主要的试剂及仪器………………………………………………………………………．7
2．3．1总RNA的提取及第一链cDNA的合成……………………………………………．7
2．3．2
7 7
2．3．3 RACE及5
pjhspTO-2和pjhsp90基因3RACE的克隆………………………．10
2．4
2．4．1
pjhspTO-2和pjhsp90cDNA序列ORF的扩增……………………………………一11
2．4．2原核表达载体的构建………………………………………………………………．12
2．4．3蛋白的诱导表达与检测……………………………………………………………．13
2．4．4Western
blot分析…………………………………………………………………………………………．13
2．5
2．5．1龟纹瓢虫不同温度胁迫下生物学状态观察………………………………………．．14
2．5．2龟纹瓢虫吡虫啉处理下的生物测定………………………………………………．．14
2．5．3龟纹瓢虫胁迫处理…………………………………………………………………15
2．5．4总RNA的提取……………………………………………………………………．．15
2．5．5
cDNA第一条链的合成……………………………………………………………．．15
2．5．6荧光定量PCR引物的设计…………………………………………………………16
2．5．7定量PCR引物特异性检测…………………………………………………………16
2．5．8定量片段的确认……………………………………………………………………16
东北农业大学农学硕士学位论文
2．5．9荧光定量PCR………………………………………………………………………16
2．5．10数据处理……………………………………………………………………………17
3．结果与分析…………………………………………………………………………………一18
3．1
3．1．1
pjhsp70和pjhsp90
3．1．2
3．1．3
3．2．1
3．2．2
3．2．3
3．3．1
3．4．1龟纹瓢虫不同温度胁迫下生物学状态观察………………………………………．．36
3．4．2吡虫啉对龟纹瓢虫成虫的生物测定………………………………………………．．36
3．4．3荧光定量分析特异引物的确
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