肉毒梭状芽孢杆菌课题讲稿摘要.pptVIP

2013年8月3日，新西兰最大乳品公司恒天然集团发布消息，称该公司一个工厂2012年5月生产的浓缩乳清蛋白检出肉毒杆菌，可能受污染的产品用于婴儿奶粉、儿童成长奶粉和运动饮料的生产。新西兰当局宣佈全球召回1000吨可能遭到污染的乳制品。 1896 年 Vahermengen 从腊肠中毒研究中，首先分离出肉毒梭菌 并证实它能在厌氧环境中生长 且可产生外毒素—— 肉毒毒素 1910年获悉肉毒毒素在抗原性上有所不同, 按免疫学上的差异可分为 A B C D E F G 等7 个型别, 因而将肉毒梭菌也分为对应的 7 个型 肉毒毒素是迄今已知的毒性最强的物质，其小鼠LD50介于0.1~1ng/kg。纯化结晶的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠，对人的致死剂量约0.1μg。 其毒性是KCN的10000倍。 外毒素，活体肉毒杆菌是无法释放肉毒素的，细胞裂解后释放前体毒素 温度、湿度，空气和光照都会使毒素降解 常规的消毒方法既能使其灭活 ——氯， 加热85?C 5min 人与人不能传播 存在肉毒素抗毒素 （但对已经存在的症状无效） 对碱性溶液很不稳定 肉毒素的毒害及作用机理 引起肉毒中毒的食品，因饮食习惯、膳食组成、制作工艺不同而有差别： 美国：以罐头食品引起中毒为主 日本：以鱼制品中毒较多 欧洲：以腊肠、火腿和保藏的肉类为主 我国：则是与发酵食品有关，如自制豆酱、豆腐乳和面酱等，有少数发生于各种不新鲜肉、蛋、鱼类食品。 其次，薄膜包装食品因其保存环境有利于肉毒梭菌繁殖，也能引起中毒。 另外，若肉毒梭菌毒素附着于水果、蔬菜和谷物或厨具上亦可引起中毒。 1、 潜伏期：数小时至数天不等，一般为12～48 h，长者可达8--10天，主要决于动物种类和摄入毒素的量。 2、主要表现为运动麻痹症状：视力减弱、全身无力、伸舌和张口困难、抬头费力、瞳孔散大、呼吸麻痹等。 3、发病快：食入毒素后，短的经过6 h，长的2～10 天开始发病。肉毒中毒死亡率较高，一般为20-40% 通过培养分离得到的毒素以前体毒素的形式存在： 神经毒素(Bont)、血凝素(HA)、非血凝素(NTNH)、RNA 神经毒素(Bont)：神经元底物特异性的催化活性 非毒素组分：主要是起到保护毒素活性的作用 血凝素：维持毒素三维结构的稳定 还可能协助毒素穿过肠壁进入血液和淋巴循环 LC中含有1个Zn2+结合序列 Bont必须结合1个Zn2+才有活性；可用重金属螯合剂使其失活 Zn2+可被其它二价离子取代形成金属替换毒素 注意食品来源 注意个人卫生及食品处理 预防婴儿伤口感染 可用肉毒梭菌类毒素预防注射：1ml/次，皮下注射，1次/周，共注射3次。 用食者发生肉毒中毒症状：应立即注射多价肉毒抗毒血清1000--2000U，并去医院就诊，以防发病。 易蔓延生长、有不规则边缘，斜射光照射有虹彩样 厌氧培养，需用石蜡油密封 小鼠生物学实验法 1.样品处理： 液体不用处理直接离心得上清液，固体和半流动检样加明胶磷酸盐缓冲液，浸泡，研碎后离心得上清液。调PH至6.2，加10%胰酶（9:1v/v）混匀，得胰酶激活处理液。 2.检出试验： 取上清液和胰酶激活处理液分别注射（0.5mL）小鼠三只，观察四天。 阳性：24h内发病，死亡 主要症状：竖毛，四肢瘫软，呼吸困难最终死于呼吸麻痹。 将阳性试验样品分成三份： 第一份加等量多型混合肉毒抗毒诊断血清混匀， 第二份加等量明胶磷酸盐缓冲液混匀，煮沸10min, 第三份加等量的明胶磷酸盐缓冲液混匀。 三份混合液分别注射（0.5mL)小白鼠两只，观察4d。 阳性：若一二两份样受试小鼠存活，而第三份死亡，则可判定肉毒素存在 取经过确证实验的阳性样品，用明胶磷酸盐缓冲液做成5、50、500、5000倍的稀释液，各注射两只小鼠（方法同上）。根据动物死亡情况计算大体的毒力（最小致死剂量MLD/mL或MLD/g) 例：5、50、500倍的稀释液致使小鼠全部死亡，5000倍稀释液的受试动物全部存活，毒力大致为1000-10000MLD/mL。 将样品稀释至10-1000MLD/mL范围 分别与各单型肉毒抗毒诊断血清等量混匀，注射小鼠（方法同上），以缓冲液为阴性对照 哪组实验小鼠存活，即说明该毒素是哪一种类型 降低其免疫反应 利用重链的跨膜转运机制将药物带入细胞内 实验组:采用针对A、B、E、F型肉毒梭菌肉毒毒素基因设计的特异性引物进行多个PCR扩增，每个PCR反应管检测一种类