东莞大蕉超表达拟南芥CBF1基因及其抗寒性检测.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(8):1653-1660 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.08.022 东莞大蕉超表达拟南芥CBF1基因及其抗寒性检测 1, 2 2 2 2 2 2 刘 凯 ，胡春华 ，杜发秀 ， 张玉娥 ，魏岳荣 ，易干军 1 2 （湖南农业大学园艺园林学院，长沙 410128 ；广东省农业科学院果树研究所/农业部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室，广州 510640 ） 摘要：【目的】研究超表达拟南芥CBF1基因（ AtCBF1）对大蕉抗寒性的影响，为从大蕉克隆抗寒相关基因奠 定基础。【方法】采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系，获得转 AtCBF1 基因的大蕉植株；利用 GUS 组织染色、PCR、RT-PCR 以及 RT-qPCR 对转基因植株进行鉴定；比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征 以及超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量等生理生化指标，鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力。【结果】 试验共获得 6 个抗性再生转化系。GUS 组织染色结果表明，除 T1 外，其余均为阳性；PCR 鉴定结果表明，AtCBF1 在 6 个抗性再生转化系均为阳性，而 GUS 基因在 T1 转化系中没有检测出；RT-PCR 结果表明，AtCBF1 在 6 个转化 系均得到表达，对T1、T2和 T3 3个转化系进行RT-qPCR 检测发现，AtCBF1基因在3个转基因株系表达水平存在 差异；在低温处理下，转基因植株的叶片相对电导率、MDA的累积都低于非转基因植株，而SOD总活性高于对照； 低温处理条件下，转基因植株叶片的冷害症状明显轻于对照。【结论】 AtCBF1 在大蕉中超表达，具有增强大蕉SOD 活性，降低因低温导致的MDA含量和离子渗漏率，缓解质膜过氧程度，进而改善大蕉植株抗低温胁迫的能力。 关键词：大蕉(Musa spp.ABB group)；拟南芥CBF1基因；转基因；抗寒性 Over-Expression of the Arabidopsis CBF1 Gene in Dongguandajiao (Musa spp.ABB group) and Detection of Its Cold Resistance 1,2 2 2 2 2 2 LIU Kai , HU Chun-hua , DU Fa-xiu , ZHANG Yu-e , WEI Yue-rong , YI Gan-jun 1 2 ( College of Horticulture and Landscape, Hunan Agricultural University, Changsha 410128 ; Fruit Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural Sciences /Key Laboratory of South Subtropical Fruit Biology and Genetic Resource Utilization, Ministry