稻田土壤nirS型反硝化细菌群落对氮肥水平的响应.pdfVIP

中国农业科学 20 13,46(9): 1818-1826 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.009 稻田土壤nirS 型反硝化细菌群落对氮肥水平的响应 宋亚娜，吴明基，林 艳 （福建省农业科学院生物技术研究所/福建省农业遗传工程重点实验室，福州 350003 ） 摘要：【目的】基于水稻田间定位试验，利用nirS 功能基因研究不同氮肥水平对稻田土壤反硝化细菌群落多 样性的影响。【方法】运用 PCR-DGGE （聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳）结合 DNA 克隆测序和荧光定量 PCR （Real-time PCR）技术对反硝化细菌nirS 基因进行检测，分析田间定位试验第4 年不同氮肥水平下稻田nirS 型 反硝化细菌群落结构和丰度的变化。【结果】依据DGGE 图谱计算的群落多样性指数显示，与不施肥对照处理（CK） -2 -2 -2 比较，施用氮肥处理（N1：75 kg N·hm ，N2：150 kg N·hm 和N3：225 kg N·hm ）可促进稻田土壤nirS 型反硝 化细菌群落多样性指数提高，尤其在水稻生长的齐穗期和成熟期后者均显著高于前者 （P＜0.05）。但群落多样性 指数在N1、N2 和N3 处理间的差异主要表现在水稻分蘖期和齐穗期的表层土壤中，N3 可显著高于N1 （P＜0.05）。 冗余分析结果显示水稻生育时期对稻田土壤nirS 型反硝化细菌群落结构的影响较大，表层和根层土壤的群落结构 都与生育时期存在显著相关性（P=0.002，0.002）；而不同氮肥水平对群落结构的显著性影响仅表现在稻田表层土 壤中（P=0.002）。荧光定量PCR 结果显示氮肥水平提高可促进稻田土壤nirS 型反硝化细菌丰度增加，在水稻分蘖 期和齐穗期内表层和根层土壤的nirS 基因拷贝数均存在CK＜N1＜N2＜N3 的趋势，且以齐穗期时在表层土壤中的 差异最大，不同处理间的差异都达到显著水平（P＜0.05）。同时，本研究获得稻田反硝化细菌nirS 基因片段序列 8 条登录GenBank （登录号：JX997923、JX997924、JX997926—JX997931）。此外，本试验中N1、N2 和N3 处理比 - CK 处理分别增产59%、92%和107%，表层和根层土壤中NO -N 含量也随氮肥用量提高而增加。【结论】氮肥用量增 3 加促进了稻田土壤nirS 型反硝化细菌丰度及群落多样性指数的提高，尤其在稻田表层土壤中。氮肥水平提高还可 改变稻田表层土壤nirS 型反硝化细菌的群落结构。综合分析表明稻田表层土壤的nirS 型反硝化细菌群落对氮肥 水平提高的响应程度更明显。 关键词：氮肥水平；反硝化细菌；nirS 基因；群落结构；群落丰度 Response of the Denitrifying Bacterial nirS Gene Community to Nitrogen Fertilizer in Paddy Field SONG Ya-na, WU Ming-ji, LIN Yan ( Institute of Biological Technology, Fujian Academy of Agricultural Sciences/Fujian Province Key Laboratory of Genetic