含有扩增内标的食品中猪肉和鸡肉成分Taqman探针实时荧光PCR检测方法的建立.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(21):4578-4585 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.21.021 含有扩增内标的食品中猪肉和鸡肉成分Taqman 探针实时 荧光PCR 检测方法的建立 1 2 1 1 1 何玮玲 ，胡序建 ，程 欣 ，黄 明 ，周光宏 1 2 （南京农业大学食品科技学院/ 肉品加工与质量控制教育部重点实验室，南京 210095 ； 河南省商丘市技术监督局/ 国家面粉及制品质量监督 检验中心，河南商丘 476000 ） 摘要：【目的】建立含有扩增内标（IAC，Internal amplification control ）的用于食品中猪肉和鸡肉成分 鉴别的Taqman 探针实时荧光PCR 检测方法。【方法】分别基于猪的beta actin 基因和鸡的 transforming growth factor 基因设计引物和探针；考察引物和探针的特异性与灵敏度；设计并构建扩增内标，优化体系中扩增内标浓 度，建立内标实时荧光PCR 体系；使用该检测体系对鲜肉和熟肉来源的DNA 模板进行检测评价；应用该体系对市 售38份样本进行盲样检测。【结果】含有扩增内标的Taqman 探针实时荧光PCR 体系能有效地进行食品中猪肉和鸡 肉成分的快速检测，非目标物种在40 个循环内均无出现扩增，检出限均为 0.5 ng DNA；该体系对鲜肉和熟肉来 源的DNA 模板检测无显著差异；对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】该方法准确稳定，可用于 食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测。 关键词：扩增内标；检测；实时荧光PCR；鸡肉成分；猪肉成分 Establishment of a Taqman Real-time PCR with Internal Amplification Control for the Detection of Chicken and Pork Ingredient in Food Products 1 2 1 1 1 HE Wei-ling , HU Xu-jian , CHENG Xin , HUANG Ming , ZHOU Guang-hong 1 ( College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University/Key Laboratory of Meat Processing and Quality 2 Control, Ministry of Education, Nanjing 210095；Shangqiu Bureau of Quality and Technical Supervision/National Flour and Flour Products Supervision and Inspection Center, Shangqiu 476000, He ’nan) Abstract : 【Objective 】A Taqman real-time PCR