牦牛HSP27基因的克隆及其在雌性生殖器官中的表达.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(20):4178-4187 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.20.017 牦牛HSP27基因的克隆及其在雌性生殖器官中的表达 何翃闳，崔 燕，潘阳阳，樊江峰，胡 威，张译夫，刘鹏刚，李 秦，余四九 （甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070 ） 摘要：【目的】克隆牦牛热休克蛋白 27(heat shock proteins27，HSP27)基因，分析其生物学特性，研究正 常生理条件下HSP27基因在母牦牛主要生殖器官中的表达差异。【方法】采取卵泡期后期、黄体期后期同侧的卵巢、 输卵管和子宫，以及妊娠期早期（胚胎约长2.3cm）妊娠侧的卵巢、输卵管和子宫组织，以其cDNA 为模板，利用 RT-PCR扩增牦牛HSP27基因，并将纯化的PCR产物克隆到 pMDTM 18-T Vector 载体中进行测序；利用生物信息学软 件对HSP27基因的特征进行生物信息学分析，预测功能结构域；采用实时荧光定量 RT-qPCR 测定繁殖周期母牦牛 主要生殖器官中的相对表达量，用 SPSS19.0 软件对试验数据进行差异显著性分析。【结果】成功克隆出包含完整 编码区的牦牛HSP27基因序列，其编码区长450bp（GenBank 登录号：KP716832），可编码149个氨基酸，其中含 量最高的是亮氨酸Leu（10.7%），含量最低的是色氨酸Trp（0.7%）。HSP27编码区蛋白原子个数为2 366，分子式 为C H N O S ，分子量为16.722kD，理论等电点为5.33；HSP27编码蛋白为非跨膜可溶性蛋白。同源性分析显 747 1189 205 220 5 示，牦牛 HSP27 基因的核苷酸序列与家牛、印度水牛、绵羊、藏羚羊、虎鲸、野骆驼、野猪、马、灰狼、人和猩 猩的核苷酸序列同源性分别为99.8%、98.4%、97.8%、97.6%、90.3%、89.7%、89.7%、86.7%、86.7%、85.5%和85.3%， 牦牛 HSP27 基因的氨基酸序列与家牛、印度水牛、绵羊、藏羚羊、虎鲸、野骆驼、野猪、马、灰狼、人和猩猩的 氨基酸序列同源性分别为100%、100%、100%、100%、96.3%、100%、96.8%、100%、100%、96.3%和96.3%；系统进 化树表明，牦牛HSP27基因与家牛、印度水牛、绵羊和藏羚羊的进化水平较为相近，与灰狼、猩猩和人类的较远。 RT-qPCR结果表明，牦牛HSP27基因在卵泡期、黄体期、妊娠期不同时期的卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达， 其中在卵泡期卵巢中的表达量最高，在黄体期子宫中的表达量最低；在不同繁殖周期，牦牛 HSP27 基因在卵巢中 的表达均极显著大于在子宫中的表达，其在卵巢、输卵管和子宫的表达因妊娠而发生了显著变化。【结论】通过与 其他物种 HSP27 基因的同源性对比分析，发现 HSP27 基因在进化中具有高度保守性，同时也存在种属特异性；通 过对 HSP27 在繁殖周期母牦牛主要生殖器官中的表达情况分析，推测出 HSP27 可能参与了母牦牛妊娠的调控，为 进一步探讨HSP27在牦牛生殖过程中发挥的作用提供了参考资料。 关键词：牦牛；HSP27；基因克隆；生物信息学；表达 Cloning of Bos Grunniens HSP27 Gene and Its Expression in the Female Yak Reproductive Organs HE Hong-hong, CUI Yan, PAN Yang-yang, FAN Jiang-feng, HU Wei, ZHANG Yi-fu, LIU Peng-gang ，LI Qin, YU Si-jiu （College of Veterinary Medicine，Gansu Agricultural University，Lanz