红麻RPT4全长cDNA的克隆及其在红麻花药中的表达.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(7): 1323-1330 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.07.003 红麻RPT4 全长cDNA 的克隆及其在红麻花药中的表达 1,2 1 1,3 1 1 李 刚 ，关和新 ，牛 英 ，周 琼 ，周瑞阳 1 2 3 （广西大学农学院，南宁 530004； 广西药用植物园，南宁 530023 ； 广西柑橘研究所，广西桂林 541001 ） 摘要：【目的】克隆红麻细胞质雄性不育系与保持系花药中差异表达蛋白RPT4 相应基因的 cDNA 全长，分析 该基因在花药中的表达。【方法】采用同源克隆法和RACE 技术相结合，从保持系L23B 花药总RNA 中克隆RPT4 全 长 cDNA。通过半定量RT-PCR 检测花粉小孢子败育前、败育期间和败育晚期该基因在不育系和保持系间花药中的 表达差异。【结果】克隆得到1 596 bp 的cDNA 全长，最长开放阅读框（ORF）1 197 bp，编码398 个氨基酸的肽 序列；该蛋白与蓖麻中直系同源蛋白的相似性最高，达91.93%，内含3个模体Walker A、Walker B 和arginine finger 的保守域，暗示其具有复杂多样的重要功能。RPT4 的mRNA 在红麻不育系和保持系花药中均有表达，但在四分体 前（败育前），不育系和保持系中的表达量一致；在小孢子单核期（败育期），不育系花药中的表达量比保持系中 的低；而小孢子双核期（败育晚期）的表达变化则相反。【结论】RPT4 参与红麻小孢子的发育过程，可能具有与 红麻细胞质雄性不育相关的复杂分子功能。 关键词：红麻；细胞质雄性不育；26S 蛋白酶体调节亚基4；同重标签相对与绝对定量 Full-length cDNA Cloning and Expression Analysis of RPT4 in Anther of Kenaf (Hibiscus cannabinus L.) 1, 2 1 3 1 1 LI Gang , GUAN He-xin , NIU Ying , ZHOU Qiong , Zhou Rui-yang 1 2 （College of Agriculture, Guangxi University, Nanning 530004; Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants, Nanning 530023; 3Guangxi Citrus Institute, Guilin 541001, Guangxi） Abstract: 【Objective 】This study aims to clone the full-length cDNA of the corresponding gene of RPT4 that with differential expression between cytoplasmic male sterile (CMS) lines and their maintainers in kenaf (Hibiscus cannabinus L.) and to analyze it