棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系线粒体基因组文库的构建.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(6):1603-1610 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.06.005 棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系 线粒体基因组文库的构建 1，2 1，2 1 1 黄晋玲 ，胡建斌 ，张 锐 ，郭三堆 1 2 （中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081； 山西农业大学农学院，山西太谷 030801 ） 摘要：【目的】构建棉花晋 A 细胞质雄性不育系及其保持系的线粒体 BAC 文库，为研究棉花线粒体基因组结 构以及棉花细胞质雄性不育的形成机理提供基础。【方法】在借鉴其它作物的线粒体基因组BAC文库构建方法的基 础上，对棉花线粒体 DNA 的提取及其 BAC 文库的构建进行探索和优化，构建了棉花晋 A 细胞质雄性不育系及其保 持系的线粒体BAC文库，并采用同源克隆的方法克隆棉花线粒体的功能基因。【结果】构建的不育系和保持系的线 粒体基因组文库分别包括2 600个克隆，插入DNA片段大小在10.3 kb 和37.5 kb之间，平均分别为22.29 kb 和 21.36 kb。重组子的覆盖率分别达到棉花线粒体基因组的 79 倍和 76 倍。获得了 3 个棉花线粒体功能基因序列， 通过比较，证明晋 A 不育系与其保持系的这 3 个基因序列无差异；以这 3 个基因为探针筛选文库，均获得阳性克 隆。【结论】分别构建了棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系线粒体基因组的BAC 文库。获得了晋A不育系与其 保持系的 orfB，cox Ⅰ和nad4L 3个基因的全序列，通过比较，证明晋A不育系与其保持系在 orfB、cox Ⅰ和nad4L 基因全序列上无差异。 关键词：棉花；细胞质雄性不育；线粒体基因组；细菌人工染色体（BAC）文库 BAC Library Construction for Mitochondrial Genome of JA Cytoplasmic Male Sterile and Maintainer Lines in Cotton 1,2 1,2 1 1 HUANG Jin-ling , HU Jian-bin , ZHANG Rui , GUO San-dui 1 2 ( Biotechnology Reasearch Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081 ; College of Agronomy, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi) Abstract: 【Objective 】The experiment was carried out to construct mitochondrial genome BAC libraries of cotton JA cy