牦牛铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建及其表达研究.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(23):4928-4935 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.23.019 牦牛铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建及其表达研究 1 1 1 2 1 徐亚欧 ，袁 忠 ，毛德才 ，毛 亮 ，郑玉才 1 2 （西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041 ， 泸州医学院心肌电生理研究室，四川泸州 646000 ） 摘要： 【目的】为解决医用超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）来源的限制，利用基因工程方法 构建牦牛 Cu,Zn-SOD 原核表达系统，为重组牦牛 Cu,Zn-SOD 作为注射用药奠定基础。【方法】RT-PCR 扩增牦牛 Cu,Zn-SOD编码基因，构建Cu,Zn-SOD/pET22b(+)重组表达载体，并转化到 E.coli BL21(DE3)宿主菌，经IPTG 进 行诱导表达。表达产物经SDS、活性染色及邻苯三酚法进行检测，采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度。 【结果】本试验成功获得了牦牛 Cu,Zn-SOD cDNA，长 456 bp，编码 152 个氨基酸。与普通牛 SOD 编码基因序列 cDNA一致率为 99.6%，氨基酸序列一致率为98.7%，表达产物分子质量约为32 kD。酶粗提取液比活约为35U·mg-1 。 重组蛋白浓度 0.2772 (mg·mL-1)。【结论】本研究成功构建了牦牛 Cu,Zn-SOD/pET22b(+)原核表达载体，表达量较 高、稳定性强，重组表达产物具有较高生物学活性。 关键词：牦牛；Cu,Zn-SOD；克隆；原核表达 Cloning and Expression of Yak Copper, Zinc-Superoxide Dismutase in E.coli 1 1 1 2 1 XU Ya-ou , YUAN Zhong , MAO De-cai , MAO Liang , ZHENG Yu-cai (College of Life Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041; Lab of Myocardium Electrophysiology, Luzhou Medical College, Luzhou 646000, Sichuan) Abstract: 【Objective 】 Due to the medical superoxide dismutase (SOD) source is restricted from animals and plants, establishment of the prokaryotic expressing system of yak Cu, Zn-SODpET22b(+)-E. coli BI21(DE3) by genetic engineering method is a basis for recombinant SOD protein of clinical injection. 【Method 】 Yak Cu, Zn-SOD gene was