黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶全长DNA的克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(7): 1338-1346 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.011 黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶全长 cDNA 的克隆及表达分析 1, 2 1 1 1 金晓霞 ，秦智伟 ，周秀艳 ，武 涛 1 2 （东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030； 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院，哈尔滨 150025） 摘要： 【目的】克隆黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因的cDNA，并进行生物信息学和表达分析，为研究 该基因的功能奠定基础。【方法】通过对乙烯利诱导黄瓜茎尖 SSH 文库的筛选，采用 RT-PCR 和电子克隆技术， 获得黄瓜CsSAHH 基因的cDNA 全长序列(NCBI编号：HQ444960, CsSAHH)。运用半定量RT-PCR，分析CsSAHH 基因 在乙烯利诱导后的茎尖和雌雄花不同部位的表达。通过生物信息学方法预测CsSAHH 基因的蛋白结构。【结果】黄 瓜CsSAHH 基因的cDNA 全长1 545 bp，编码485 个氨基酸，其理论上的等电点pI＝5.66，分子量MW＝53.1 kD。 CsSAHH 基因在黄瓜茎尖受乙烯利诱导增强表达，在黄瓜雄花中的雄蕊表达较弱。CsSAHH 理化性质表明，该蛋白无 明显的信号肽；蛋白二级结构主要由loop 环和α螺旋构成，含少量的β折叠，预测发现该蛋白分别在85—99 氨 基酸残基和262—279 氨基酸残基处各有1 个S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性功能区。CsSAHH 基因氨基酸序列与 苜蓿的同源性为63%，与水稻、玉米、拟南芥等作物同源性较低。【结论】成功克隆黄瓜CsSAHH 基因cDNA 序列， 在85—99 氨基酸残基和262—279 氨基酸残基处各有1 个S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性功能区。该基因在茎 尖受乙烯利诱导增强表达，在雄蕊中表达较弱。在未处理的雌雄花芽发育不同阶段，雌花芽中表达强于幼果和雄 花芽。 关键词：黄瓜；S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶；克隆; 表达；蛋白结构预测 Cloning and Expression Analysis of S-Adenosyl-L-Homocysteine Hydrolase in Cucumber (Cucumis stavius L.) 1, 2 1 1 1 JIN Xiao-xia , QIN Zhi-wei , ZHOU Xiu-yan , WU Tao 1 2 ( College of Horticulture, Northeast Agriculture University, Harbin 150030; College of Life Science and Technology, Harbin Normal University, Harbin 150025) Abstract: 【Objective 】The cDNA sequence of cucumber S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase （CsSAHH) gene was cloned and th