能产生多角体的可线性化杆状病毒的构建.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(11):3893-3897 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.061 能产生多角体的可线性化杆状病毒的构建 1 1 2 2 1 于 峰 ，朱姗颖 ，李 兵 ，沈卫德 ，王文兵 1 2 （江苏大学生命科学研究院，江苏镇江 212013 ； 苏州大学生命科学学院，江苏苏州 215123 ） 摘要：【目的】改进用于同源重组研究的制备杆状病毒DNA的方法。【方法】采用PCR 方法从BmNPV 中扩增出 多角体基因，并在其两端引入 Bsu36 I 酶切位点。将此片段克隆入转移载体 pBacPAK8 中，与线性化的杆状病毒 DNA 共转染昆虫细胞，获得重组病毒。该病毒能形成多角体，便于纯化，同时可以被 Bsu36 I 酶切。该重组病毒 的多角体纯化后被裂解，并提取病毒DNA。病毒DNA经Bsu36 I酶切后，与含gfp基因的转移质粒共转染家蚕BmN 细胞，在荧光显微镜下观察重组病毒的转染效率。【结果】BmNPV 多角体基因克隆入转移载体 pBacPAK8 中后，与 线性化的AcPak6及BmPak6 DNA共转染sf细胞及BmN细胞，均能产生大量的多角体。获得的重组病毒DNA经酶切 后，进一步与含gfp基因的转移质粒共转染的实验表明，这种改造后的重组病毒仍具有较高的转染重组率。【结论】 本实验成功地对用于同源重组的杆状病毒DNA进行了改进，简化了病毒DNA的纯化方法，并且重组效率较高。 关键词：昆虫-杆状病毒；表达；BmNPV；DNA提取 Improvement of Baculoviral DNA Extraction in Insect-Baculovirus Expression System 1 1 2 2 1 YU Feng , ZHU Shan-ying , LI Bing , SHEN Wei-de , WANG Wen-bing (1 Institute of Life Sciences, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, Jiangsu; 2College of Life Sciences, Suzhou University, Suzhou 215123, Jiangsu) Abstract: 【Objective 】 The aim of this research is to improve the method of baculovirus DNA preparation used for homologous recombination. 【Method 】 Polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify the polyhedrin fragment with two Bsu 36 I sites added. The fragment, which was cloned into transfer vector pBacPAK8, was cotransfected with linear baculoviral DNA into insect cells and the recombination virus was gained. The harveste