拟南芥转录因子AtMYB73转录活性区域分析及互作蛋白的筛选.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(23):4754-4762 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.23.020 拟南芥转录因子AtMYB73转录活性区域分析及互作蛋白的筛选 1 2 1 1 1 1 1 樊锦涛 ，贾 娇 ，蒋琛茜 ，王冠宇 ，张 靖 ，邢继红 ，董金皋 1 2 （河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室，河北保定 071001 ； 吉林省农林科学院植物保护研究所，吉林公主岭 136100 ） 摘要： 【目的】确定拟南芥抗逆转录因子AtMYB73的转录活性区域并筛选获得与其互作的蛋白，为进一步阐 明 AtMYB73 调控拟南芥抗逆的分子机制奠定基础。【方法】构建转录因子 AtMYB73 的酵母诱饵表达载体 pAS1-AtMYB73，检测pAS1-AtMYB73的自激活性及其对酵母Y190的细胞毒性。克隆 AtMYB73 的N端区域（含有R2R3 结构域）和C 端区域（不含R2R3结构域），检测AtMYB73 的N端和 C端的转录激活活性，分析AtMYB73自激活结 构域的位置。利用酵母双杂交技术，以AtMYB73为诱饵筛选拟南芥的cDNA文库，将阳性克隆进行鉴定、测序；利 用 TAIR 数据库对筛选获得的 AtMYB73 的候选互作蛋白进行分析。构建 AtMYB73 和 F12F1.4 的酵母双杂交载体 pGBDT7-AtMYB73和pGADT7-F12F1.4，通过酵母双杂交技术，对其互作关系进行分析。【结果】含pAS1-MYB73的酵 母菌在不同浓度的3-AT的SD/-His/-Trp/、SD/-Ade/-Trp培养基上均能生长，表明AtMYB73具有较高的自激活活 性。含 pAS1-AtMYB73 的酵母菌在 SD/-Trp/Amp 液体培养基中培养 24 h 的 OD600 值大于 0.8，表明诱饵载体对酵母 Y190 没有细胞毒性。成功构建了 pAS1-AtMYB73-N 和 pAS1-AtMYB73-C 载体，获得了含有 pAS1-AtMYB73-N 和 pAS1-AtMYB73-C的酵母；含pAS1-AtMYB73-N的酵母在含X-a-gal的YPAD培养基上呈现无色，而含pAS1-AtMYB73-C 的酵母则呈现蓝色，表明 AtMYB73 的 C 端有明显的自激活性，而 N 端没有自激活性。以 AtMYB73 为诱饵，筛选拟 南芥的 cDNA 文库，获得了与光合作用、防御反应途径、抗逆等相关的 8 个蛋白。利用酵母双杂交技术，确定了 MYB73与F12F1.4之间存在一定的互作。【结论】拟南芥抗逆转录因子AtMYB73具有较高的转录激活活性，其活性 区域位于 C 端；以 AtMYB73 为诱饵，筛选获得了与光合作用、防御反应途径、抗逆等相关的 8 个 AtMYB73 的候选 互作蛋白；利用酵母双杂交技术，确定了AtMYB73与F12F1.4之间的互作关系。 关键词：拟南芥；转录因子AtMYB73；转录活性；酵母双杂交；互作蛋白 Regional Analysis of Transcription Activity and Screening of Interaction Proteins of AtMYB73 Transcription Factor in Arabidopsis 1 2 1 1 1 1 1 FAN Jin-tao , JIA Jiao , JIANG Chen-xi , WANG Guan-yu , ZHANG Jing , XING Ji-hong , DONG Jin