鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(5):1813-1819 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.05.039 鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用 孙法良，刁有祥，孙 宁，马艳芳，纪 巍 （山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271018 ） 摘要： 【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体，建立检测氟苯尼考的间接竞争 ELISA 新方 法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联，得到免疫抗原和包 被抗原，其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。 建立并优化了间接竞争 ELISA 检测方法。【结果】抗血清效价为 1﹕102 400。最佳包被抗原浓度为 0.5 µg·ml-1 ， 最佳抗体工作浓度为1 ﹕6 400，酶标二抗的工作浓度为1 ﹕20 000。回归方程 2 Y = -0.1516X + 0.788（R = 0.9859）， 检测范围为 0.18～500 ng·ml-1 -1 ，检出限为 0.18 ng·ml ，批内和批间平均变异系数分别为 4.86%和 7.77%。交叉反 应试验中，抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%，与其它药物交叉反应 率均小于0.01%，表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500 ng·g-1 在鸡肉中添加，回收率为84.14%～ 106.1%，变异系数为 2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗 FFC 抗体，建立了鸡肉中氟苯尼考 残留检测的ELISA方法。结果表明，所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。 关键词：氟苯尼考；残留检测；间接竞争ELISA Establishment and Application of Detecting the Residues of Florfenicol in Chicken Muscle by Indirect Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay SUN Fa-liang, DIAO You-xiang, SUN Ning, MA Yan-fang, JI Wei (College of Animal Science and Technology, Shandong Agricultural University, Taian 271018, Shandong) Abstract: 【Objective 】 The purpose of the study is to obtain special antibody and develop competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ciELISA) for florfenicol 【Method 】 Florfenicol hapten was conjugated with the carrier proteins bovine serum albumin (BSA) as immunogen and with human serum albumin (HSA) as coating an